紫外分光光度法测定酸奶中的纳他霉素

紫外分光光度法测定酸奶中的纳他霉素

一、     实验目的

1、进一步熟悉紫外分光光度计

2、学习在紫外光谱区测定酸奶中的纳他霉素含量

二、     实验原理

如图，纳他霉素在紫外光谱范围内在280nm处有肩，340 nm以上无明显的吸收，由于纳他霉素含有四烯环，因此在290、303、318 nm处有尖锐的吸收峰，其最大吸收波长为303 nm，且该波长附近吸收值稳定范围较宽，检测器波长即使有小的漂移也不会引起大的检测误差，因此，选择303 nm作为纳他霉素的检测波长既有足够的灵敏度，又有可靠的稳定性能，是理想的检测波长。而酸奶在303nm处干扰物质较少，因而可用紫外分光光度法对酸奶中纳他霉素进行测定。

三、     使用仪器、材料

仪器：紫外分光光度计、石英比色皿、分析天平、快速混匀器、25ml和50ml容量瓶、50ml三角瓶、离心机、500μl和1000μl移液枪

试剂：酸奶，甲醇，冰醋酸，95%纳他霉素标准品，蒸馏水

四、     实验步骤

1、配制纳他霉素标准液

取10mg的95%纳他霉素标准品，用甲醇：冰醋酸：蒸馏水=64：8：28溶液溶解，最后定容于100ml，备用；

分别取上述纳他霉素贮备液500、750、1000、1250、1500、1750、2000μl于7只50ml容量瓶中，用甲醇：冰醋酸：蒸馏水=64：8：28溶液稀释至刻度，摇匀；

2、绘制标准曲线

以甲醇：冰醋酸：蒸馏水=64：8：28溶液为参比，在波长303nm处测定步骤1配制的7个标准溶液的吸光度。

3、样品测定

样品溶液的制备：称酸奶样品2.5克（精确到0.001克），加甲醇16ml，加冰醋酸2ml，振荡摇匀3-5分钟，加水定容于25ml，离心后待用；

以未加纳他霉素的酸奶为空白对照，处理方法同样品溶液的制备。在波长303nm处测定样品的吸光度。

4、回收率和精确度实验

取处理好的酸奶样品2份，1份作为本底值，另1份加入已知质量浓度标准液，分别按上面方法测定纳他霉素含量，再根据测定值计算出纳他霉素的回收率；

相对标准偏差（RSD）或变异系数（CV）：用不同仪器测定同一样品，计算实验方法的重现性。

实验数据：

1.绘制标准曲线

紫外分光光度计1

根据表格数据绘制标准曲线：

紫外分光光度计2

根据表格数据绘制标准曲线：

紫外分光光度计3

根据表格数据绘制标准曲线：

紫外分光光度计4

根据表格数据绘制标准曲线：

2.样品测定

加有纳他霉素的酸奶样品在四台分光光度计下测得的OD值

3.回收率和精确度实验

以已测定样品作为本底值，加入已知质量浓度标准液测得OD303值分别为0.191、0.179、0.176、0.182。