实验方法原理 | RNA 提取过程中最应注意的是:组织或细胞在变性液中完全裂解的同时,如何抑 RNase 引起的 RNA 降解问题。在直接加工新鲜组织时,所有的细胞能尽可能快的接触变性剂以完全裂解这一步是相当重要的。一些难以加工的组织,例如:坚硬的肿瘤、细菌细胞、植物根部等,即使使用匀浆器一般也不能很有效的裂解。此时,通常可以在处理组织时,先对其进行冷冻处理,以使之充分裂解。 为使迅速冷冻样品,以使整块组织彻底冷冻,因此,在冷冻前应先将组织切成小块,然后将其浸没于液氮中。这将会使组织块以最快的方式冷冻。另外,也可将一个金属盘置于干冰上作为冷冻的表面,以对片状的组织进行快速的冷冻。 下面三种力法分别描述用三种不同的方式加工 0.lg 冷冻的小鼠肝脏组织,以产生组织/细胞裂解产物。裂解产物可进行 RNA 的提取纯化,或用于估计 pdy(A)+RNA 的产量。虽然这三种方法同是利用胍缓冲液以彻底裂解细胞,但是它们在先前的步骤中,即如何加工组织或是在如何裂解的过程中有所不同。 |
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实验步骤 | 方法一: 在匀浆器中加工冷冻的组织 |