经典的免疫沉淀是可溶性抗原与其抗体产生可见沉淀反应的血清学试验。后来发展为抗原抗体结合后,用固相化的蛋白A或蛋白G小珠等来吸附分离抗原抗体复合体,达到检测微量抗原或抗体的目的。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后,再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核,然后将所得上清在10000 g 离心1 min。
2. 一次性对上清进行预处理,每200 μl 上清加入10 μl 活化后被淬灭的琼脂糖对照。在旋转揺床中室温揺荡2 h 或在4℃过夜。200 g 离心1 min,保留上清。
3. 在1.5 ml 的微量离心管中加满裂解液室温作用10 min,对其进行预包被。吸去液体后,加入105~106 cpm 的含抗原的放射性标记上清,加稀释缓冲液使终体积为200 μl。
4. 加入10 μl 1:1的抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。4℃在旋转摇床中摇荡1. 5~3 h,一直保持Sepharose呈混悬状。
6. 加入20~50 μl SDS样品缓冲液。由于样品缓冲液比重大于洗涤缓冲液,它可渗透到Sepharose中,不要用旋涡混合器旋起SEpharose,以免使之粘附在缓冲液液面以上的管壁。盖紧盖子,于100℃保温5 min。 |
其他 |
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