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如何看免疫沉淀的结果图

2022.5.24
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超级艾蛋木啊

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图a中,每个基因都在3'末端添加了一个V5标签,正常表达后,其产物蛋白的C末端都会携带一段V5标签(9个或14个氨基酸,通常不影响蛋白功能),那么这样一来,只要用抗V5标签的抗体检测到了目标蛋白,那么就可以说明这个转入的基因表达了。
图b中,左边是3个基因在成纤维细胞中的表达情况,左侧的数字为蛋白电泳后的大小位置(Kd)。我们知道,细胞里面的总蛋白经过电泳后,分子量越小的就会跑得越快,位置越靠近下面;而分子量越大的就跑得越慢,位置越靠近上面。用抗V5标签的抗体孵育电泳结果并显影后,携带V5标签的基因的产物就会在相应的位置产生黑色条带。由于从图a上来看,基因1、2、3的长短关系为1>3>2,那么其产物的理论大小关系就为1>3>2。左图成纤维细胞里面3个基因的表达恰好与理论结果一致,说明3个基因全部正常表达,并且不存在外显子剪切的情况。右边肌肉细胞中,转入基因2和基因3与成纤维细胞是一致的,但转入基因1的表达产物的大小却与基因3一致,说明基因1在肌肉细胞中转录后2号外显子随着内含子剪切而被剪切掉了。
这个实验一定程度上支持了真核生物的基因是断裂基因的结论,也说明了同一个基因的转录后修饰(外显子剪接)在不同的细胞和组织里可能会有差异,进而形成不同的转录本,翻译出功能不同的蛋白质。

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