实验步骤 | 溶液配制:
1. 标准核黄素溶液:1.0 μg/ml。
2. 样品液:含核黄素0.01~10 μg/ml。
3. 荧光红钠溶液:5 μg/ml。
4. 荧光消光剂:0.2 g硫代硫酸钠,加水溶解至10 ml。
操作步骤:
1. 仪器定位:在每次测定前,均需用荧光红钠溶液作为标准对荧光分光光度计定位。调好激发波长450 nm,荧光波长520 nm。调好荧光强度为100。
2. 标准核黄素荧光测定:吸取样品液10 ml,加入标准核黄素溶液1 ml,用0.1 mol/L盐酸调至pH 5.0,测定荧光强度为A。
3. 样品荧光强度测定:各吸取10 ml样品液于试管中,分别加入1 ml蒸馏水和1 ml消光剂溶液。用0.1 mol/L盐酸调至pH 5.0,于荧光光度计中测定各自的荧光强度。加水者为B,加消光剂者为C。
4 . 计算
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