染料排斥法测定细胞生存力实验

2019.4.04

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实验方法原理	萘黑、台盼蓝以及很多其他染料[KahenbachetaL1958]均不能透过活细胞。将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检査。
试剂、试剂盒	胰蛋白酶
仪器、耗材	巴斯德吸管显微镜手执计数器生存力染料血细胞计数板
实验步骤	材料无菌受试细胞，如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞合适的生长液 20ml 0.25% 胰蛋白酶 5ml D-PBSA10ml 非灭菌血细胞计数板生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑）巴斯德吸管显微镜手执计数器操作步骤 1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬，制备高浓度的细胞悬液（约1X10⁶ 个/ml)。 2. 取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片间定在适当位置上（见方案 21.1 和图 21.1)。 3 . 将一滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀。 4 . 加至血细胞计数板的计数室中（见方案21.1)。 5 . 静置1～2min (但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。 6 . 将计数板置于显微镜下，选择10X 物镜，利用网格线聚焦（图21.1)。 7 . 计数细胞总数以及着色细胞数。 8 .清洗血细胞计数板，放人盒内。展开