实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | (a)在正常分娩后6〜12h内收集和处理脐带。 (b)在脐静脉内插入导管,用PBSA完全地洗2次。 (c)夹住远端脐带。 (d)用0.1%胶原酶溶液充满静脉。 (e)夹住近端脐带。 (f)将脐带在37℃孵育20min。 (g)轻轻按摩脐带,收集含有内皮和内皮下层细胞的悬浮液,600g离心10min。 (h)用培养基重悬细胞。 (i)计数后,按1×103个细胞/cm2的密度将细胞接种到75cm2的培养瓶中。 (j)3天后更换培养基,除去未贴壁细胞,保留贴壁的细胞继续培养,每3天更换一次新鲜培养基,至大约2周后可见成纤维样细胞生长。 (k)在这种情况时,用0.05%胰蛋白酶/EDTA收集细胞,传代到新培养瓶中继续扩增。 展开 |