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染色体分离实验——Percoll梯度法

2019.4.05
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

实验材料

染色质

试剂、试剂盒

精胺精咪Percoll 溶液

仪器、耗材

聚碳酸酯离心管

实验步骤

1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。

2. 加入 10 ml Percoll 溶液,匀浆分离得到的染色质。

Percoll 溶液:

89% (v/v) Percoll

5 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

2 mmol/L EDTA

0.8 mmol/L 精胺

2 mmol/L 精咪

0.1 % 毛地黄皂苷

3. 再加 15 ml Percoll 溶液到匀浆中,充分混匀。

4. 将 35 ml 的 Percoll 混合物加入 50 ml 的聚碳酸酯离心管中,用一固定角度转头(Beckman Instruments) 在 4℃,20000 r/min 离心 30 分钟。

5. 吸出染色体带上面的全部物质,将梯度中的染色体回收于大约 10 ml 的 Percoll 溶液中。

6. 为了除去 Percoll 颗粒,以 1:2 比例用稀释缓冲液稀释染色体,1400 g 离心 45 分钟进行浓缩。

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