用 CsCl，Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度离心 三

表（三）metrizamide及其溶液的性质（20℃）

表（四）Nycodenz及其溶液的性质（20℃）

五）胶体硅（Percoll）自形成梯度
Percoll的性状（参考文献 5）
成份：硅颗粒外包覆 PVP（聚乙烯基吡咯烷酮）
密度：1.130±0.005g/ml
颗粒尺寸：15～20nm
渗透率：＜25mosm
粘性：20℃时 10±5mpa•s
PH：20℃时 9.0±0.5
折射率：20℃时 1.3540±0.005
其他：有少量（1～2％）PVP小颗粒存在
Percoll在离心场中的沉降形成密度梯度，因此 Percoll自形成密度梯度曲线的形状取决于离心转速和离心时间。Percoll是带负电荷物质，离心过程中离子的积聚将影响梯度的稳定性。但由于 Percoll颗粒较大（15nm～20nm），扩散很慢，梯度一旦形成，可长时间保持稳定。Percoll梯度离心可以直接与样品混合作自形成密度梯度离心，也可以先离心让 Percoll自形成梯度再铺样品作预形成梯度离心。
从下图可以看出用日立 R20A2角转头（8×50ml，最高转速 20,000rpm）。在 15,000rpm（RCFAV＝20,000×g），初始密度 1.07g/ml，不同离心时间的 Percoll自形成密度梯度曲线（也可以用其他品牌，同类转头）
密度（g/ml）    从液面算起的离心管水平方向的距离（毫米）
可以看出只要用很短时间，一般高速离心就可以得到我们需要的 Percoll自形成梯度曲线。
对于分离一些较大颗粒样品，如肝细胞，可以先让 Percoll离心，自形成梯度，然后将肝细胞匀浆铺在 Percoll已形成的梯度表面作速率－区带密度梯度离心。预形成梯度用1,000×g，30分或用3,000×g，15分，梯度形成后铺上匀浆作低速离心（1,000×g），
可以大大减少细胞的破损，自形成梯度形状取决于转头几何尺寸，离心转速和离心时间。 Percoll自形成梯度也可以用于亚细胞构造如质膜，重线粒体的离心分离。在这方面 Pharmacia-Biosystems AB 公司做了大量的实验，读者可以在网上查询或直接向该公司索取详细的实验资料。
附：表（五）用 0.25M蔗糖稀释配制的 Percoll等渗液的密度

表（六）用 0.15M Nacl稀释配制的Percoll等渗液的密度

参考文献：
【1】Houssais J.F.(1983) “Iodinated density gradient media ：a practical approach ” P： 43 IRL press. Ltd. Oxford.
【2】Birnie, G.D, Rickwood, D “Biological Separations in iodinated density gradient media , P193, IR1 press, Oxford.
【3】Miloslav, D., Richard, Hinton “Condition for density gradient separations” in “Preparative Centrifugation”. IRL press . Oxford. Uni.press.1992
【4】Rickwood .D. Birnie, G.D “Centrifugal separations in molecular and cell biology ,” Butterworths London(1998)
【5】Rickwood, D. Ford, T. steengard , J “Centrifugation, Essential Data” P.44 John Wiley and Sons 1994