1. 取材
用支持物盖片培养法或培养液均可；用培养液时，先吸取培养液1 毫升，500～800 转/分，离心5 分钟后去上清，余0.2 ml备用。
2. 低涨处理
用新鲜配制的0.5 %的枸橼酸溶液，处理盖片细胞或加入到1项0.2 ml中（悬液）置10 分钟。
3. 固定
用新配制的Carnoy液固定两次，共10 分钟，取出盖片凉干；如为培养液，则应先离心弃上清固定液，余沉淀物0.2 ml，制成涂片2～3 张。
4. 染色
用2 %醋酸地依红染5 分钟
染液配法：地衣红 2 g，冰醋酸 60 ml，加蒸馏水至100 ml，支原体和细胞被染成紫红色，如染色过深可用 75 ％酒精脱色。
5. 封片
纯酒精过三次，每次1 分钟，封入Euparal 或树胶中。镜下观察支原体呈暗紫色小体，附于细胞外或散在于细胞之间。
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