PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺

盖玻片水浴锅

1.  以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片（“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步）。

2.  由1×SSC中取出玻片，尽可能吸去残留玻片上的缓冲液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻片上，放24 mm×60 mm 的盖玻片于封阻液上，将载玻片放于裹以铝箔的加湿盒中，置37℃温育30 min。

3.  从加湿盒中取出玻片，倾斜使盖玻片滑掉，尽可能吸去残留封阻液，但不使玻片干燥， 加200 μl 链亲和素液于载玻片上，放盖玻片于液体上，玻片放入裹以铝箔的加湿盒中，置37℃温育30 min。

4.  从加湿盒中取出玻片，倾斜使盖玻片滑掉，将载玻片放入含42℃ 0.1% Tween 20/PBS的Coplin广口瓶中，将瓶放入42℃振荡水浴中摇5 min，用42℃ 0.1%Tween 20/PBS重复洗片2次。

5.  取出玻片，彻底吸去残液，不要使玻片干涸，加200 μl 生物素酰化HRPO溶液于玻片上，其上盖以24 mm×60 mm 盖玻片，放在裹以铝箔的加湿盒中，置37 ℃温育30 min。

6.  接歩骤4，重复洗片。

7.  从洗液中取出玻片，彻底吸去残留液，不要使玻片干涸。加0.015%H₂O₂于DAB底物液中，立即加200 μl DAB底物液于玻片上，其上盖以24 mm×60 mm 盖玻片，于室温暗处放10~20 min。

8.  颜色沉淀呈肉眼可辨，室温下，以PBS洗片5 min 终止反应。

9.  如需要，可做荧光复染以鉴别胞核（“荧光原位杂交实验”，步骤9）。 

10.  用90%甘油或适当的防褪色固片介质，加盖玻片，用相差显微镜观察或照相。