实验方法原理 | 硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而,将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合),然后再加入带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。加入标记物相应的底物后,标记物即可与底物作用形成不溶性产物,呈现斑点状着色,从而判定结果。根据所用的标记物不同,可分为:辣根过氧化物酶免疫斑点试验(使用辣根过氧化物酶作为抗抗体的标记物),碱性磷酸酶免疫斑点试验(使用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物作为酶标记物)和金银染色免疫斑点试验(使用胶体金作为抗抗体的标记物)等。其中,最常用的是以辣根过氧化物酶标记系统为基础的免疫斑点试验。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、辣根过氧化物酶免疫斑点试验
2. 置37 ℃温箱中干燥20~30 分钟 3. 滴加封闭液37 ℃温盒中封闭10 分钟
4. 用洗涤液洗1~2 次,滤纸吸干
5. 加用稀释液稀释的抗体或待检标本,置37 ℃湿盒中30 分钟
6. 用洗涤液震洗3 次×3 分钟、吸干
7. 水洗终止反应,观察结果。出现明显综色斑点者为阳性
2. 置37 ℃温箱中干燥20~30 分钟
3. 用封闭液37 ℃湿盒中封闭10 分钟
4. 用洗涤液震洗1~2 次,滤纸吸干 5. 加稀释液稀释的小鼠抗体或待检标本,置室温湿盒中30 分钟
6. 用洗涤液震洗3 次×3 分钟,吸干
7. 加1∶50稀释的兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG血清,置室温湿盒中30 分钟、洗同前、吸干
8. 加APAAP复合物于膜上、室温湿盒中30 分钟,洗同前、吸干
10. 加APAAP复合物,温育、洗涤同“9”
11. 重复“9”和“10”1~3次
12. 洗涤液震洗3次×3分钟、吸干
13. 滴加新配底物溶液显色5~10分钟,水洗中止反应,观察结果 展开 |
注意事项 | 一、免疫斑点试验的影响因素 |