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荚膜染色实验——干墨水法

2019.4.08
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

实验方法原理荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质,其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱不易着色;而且可溶于水,易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法染色,使菌体和背景着色,而荚膜不着色合在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高。制片时通常不用热固定,以免变形影响观察。
实验材料

褐球固氮菌/胶质芽孢杆菌(约 2d 无氮培养基琼脂斜面培养物)

试剂、试剂盒

绘图墨水1% 甲基紫水溶液1% 结晶紫水溶液6% 葡萄糖水溶液20% 硫酸铜水溶液甲醇

仪器、耗材

载玻片盖玻片滤纸显微镜

实验步骤

1. 制混合液

加一滴 6% 葡萄糖液于洁净载玻片的一端,然后挑取少量菌体与其混合,再加一环墨水,充分混匀。


2. 涂片

另取一端边缘光滑的载玻片作推片,将推片一端的边缘置于混合液前方,然后稍向后拉,当推片与混合液接触后,轻轻左右移动,使之沿推片接触的后缘散开,尔后以大约 30° 角迅速将混合液推向玻片另一端,使混合液铺成薄层(图 IV-4)。


3. 干燥

空气中自然干燥。


4. 固定

用甲醇浸没涂片固定一分钟,倾去甲醇。


5. 干燥

在酒精灯上方用文火干燥。


6. 染色

用甲基紫染 1~2 min。


7. 水洗

用自来水轻轻冲洗,自然干燥。


8. 镜检

用低倍和高倍镜观察。


背景灰色,菌体紫色,菌体周围的清晰透明圈为荚膜。

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注意事项

玻片必须洁净无油渍,否则,涂片时混合液不能均匀散开。


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