动物细胞与胚胎工程实验常用培养液配制与检测,可用于(1)动物细胞的培养(2)胚胎工程的发展(3)分子生物学的研究。
溶液配制法
实验方法原理 | 动物细胞工程的主要操作对象是离体条件下动物有机体的各部分组织、器官或细胞,这些用来进行离体培养的组织或器官称为外植体;动物胚胎工程的主要操作对象是配子和胚胎。要满足操作对象在离体条件下正常生存和生长发育,就必须为其提供适宜生长发育的良好营养条件,即培养液条件。动物的组织、细胞或配子、胚胎在营养代谢、生长发育等多方面相比较,存在着诸多差异,营养需求也不尽相同。所以在进行动物组织、细胞及配子、胚胎的离体操作或培养时,需要配制不同的操作液或培养液。因此,了解培养液的组成与掌握其配制方法是细胞与胚胎工程研究与实验的一项基本任务。由于动物细胞与胚胎工程操作对象的特点,常用操作液及培养液一般配制为液体状态。操作液及培养液中一些成分在溶液中不稳定,配制时一般先将液体的最基本成分配成基础液,使用前将这些成分作为添加成分加入基础液最终配制成操作液及培养液,不同的培养液及不同的实验室在添加这些成分时采用的方式有所不同。 动物细胞与胚胎工程的操作是基于无菌条件下进行的,需要建立一套满足无菌操作技术和无菌培养的环境,配制无菌的液体为最基本的条件。而液体在制备过程中往往带有各种杂菌,配制成液体后应立即灭菌,或在24小时内完成灭菌工序。由于动物细胞与胚胎工程操作液和培养液组成成分中常含有遇热易分解的物质,所以多采用过滤方法除去操作液和培养液中的细菌,并在过滤除菌时完成分装。为了检验配制的液体是否仍有细菌污染,配制成的液体应间隔一定时间进行检查,如颜色是否变化、是否发生浑浊以及是否有菌落出现等,如有必要可进行培养检查。 |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | 超净工作台、酒精棉球酒精喷壶洗涤剂水桶瓶刷试管刷超声波清洗仪控水架干燥箱电炉高压蒸汽灭菌器鼓风干燥箱纱布棉布牛皮纸硫酸纸棉绳铝盒酒精灯酒精棉球精密电子天平药匙称量纸烧杯玻璃棒吸水纸滴瓶滴管量筒注射器移液器漏斗容量瓶磁力搅拌器酸度计pH试纸针头滤器滤膜青霉素瓶血清瓶瓶塞封口膜 |
实验步骤 | 一、液体配制的准备
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注意事项 | 1. 动物细胞的培养需要在严格无菌的环境下进行。 2. 氨基酸是组成蛋白质的基本单位,不同的细胞所需要的氨基酸种类不同,要根据不同的培养的细胞,在培养液中加入不同的必须氨基酸。 |
其他 | 1. 原代细胞:将动物各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA) 或机械方法处理,分散成单细胞,在合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。 2. 传代细胞:是所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。传代培养可获得大量供实验所需细胞。 3. 动物细胞培养基按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。 展开 |