实验方法原理 | 将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒;将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母;再将文库质粒转化到酵母中 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1、 用牙签从平板中挑取单菌落(直径2~3mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。 2、 将10μl载体DNA(100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini-prep DNA”方法制得,则不需加载体DNA)。 3、 加0.5ml PLATE溶液,振荡。 4、 置于实验台上,室温培养4天。 5、 置42℃下热激15分钟。 6、 以8000~10000r/min离心10秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。 展开 |
注意事项 | 严格按照顺序加入试剂 |
其他 | 在酵母菌、脉孢菌和植物细胞中转化的主要障碍是细胞壁。把细胞壁用酶消化后便能有效地转化。 |