转基因植株的选择实验——转基因植物的分析

液氮DNA 纯化试剂盒bar 基因引物吐温PPT

PCR 分析塑料盆

一、PCR 分析

1. 当植株长到合适大小时（即 3 ~4 张叶片），取约 2 cm 长的叶片，立即放于液氮中，抽提基因组 DNA。

2. 在液氮中将叶片磨成粉末状，并使用 Wizard 基因组 DNA 纯化试剂盒提取基因组 DNA。

3. 为了确定是否为转基因植株，利用 bar 基因引物 1 和引物 2 对 DNA 做 PCR 分析，退火温度为 57℃。

4. 将 PCR 阳性植株移栽到直径为 13 cm 的塑料盆中，并继续在转基因封闭温室中生长。

二、除草剂叶片涂抹检测

1. 用 0.1% 吐温将除草剂母液（如 Challenge) 稀释成两种浓度，其活性成分 PPT 浓度分别为  2.0 g/L 和 0.2 g/L。

2. 每个待测植株，尽可能在不同分蘖上选择三张大小相近、生长健壮的叶片，避免取旗叶。立即在所选叶片植株的茎秆上做标记，分别标注为 0.2 g/L PPT、2.0 g/L PPT 和 对照（0.1% 吐温）处理。

3. 用圆珠笔在每张叶片长度一半的位置做标记用棉签蘸取适量溶液涂抹于叶片远端的半张叶片表面。

4. 为使除草剂生效，将植株放置 7 天后再评估抗/感情况。

5. 在涂抹了除草剂溶液的位置，根据除草剂溶液涂抹区域干枯伤害的百分率和除草剂转运对叶片近端区域伤害的百分率，对每张处理的叶片进行评分。

6. 如果 0.2 g/L PPT 和 2.0 g/L PPT 处理的叶片都没有检测到伤害症状，则可认为这一植株是转基因的；如果只在低浓度处理下表现出抗性，应当再用其他方法进行确认。