实验概要
去除死细胞和生长状况不佳的细胞,获得下一代细胞
实验原理
游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮状态,细胞质回缩,胞体呈圆球形。
贴壁期:细胞附着于底物上,游离期结束。血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白,这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子吸附于底物,悬浮细胞再与吸附因子附着。
潜伏期:细胞有生长活动而无细胞分裂
对数生长期:细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳
停止期:细胞长满壁后,有活力但不再分裂
主要试剂
1*PBS, 1*TE, 培养液
主要设备
移液器,吸液泵
实验材料
血清管,培养皿,上一代细胞
实验步骤
1. 取培养中的细胞XX,在XX培养皿内吸弃培养液,用XXml pbs洗去悬浮死细胞,加在侧壁避免冲起贴壁细胞。
2. 加XXml TE消化XXmin,最后一分钟拍打使贴壁细胞融在消化液内
3. 加入XXml培养液终止消化反应,小心吹打开团块
4. 空培养皿内加入适量培养基,根据传代或扩增的目的用量不同
5. 以1:XX将细胞悬液分入新培养皿,名命为XX放入培养箱XX