实验概要
学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
实验原理
胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色)，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
主要试剂
1. 固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；
2. pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
实验步骤
1. 整体测定法
1) 选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成25px左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.
2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。
3) 将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2. 表面测定法(粗筛法)
1) 擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
2) 取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
3) 放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
4) 将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
3. 检测结果判断：
1) 结果判断
结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制(为阳性)、未抑制(阴性)表示。
与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同，为阴性结果。
对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。
2) 样品检测结果记录并对检测结果进行评价。
注意事项
1. 速测卡灵敏度指标如下表所示。
部分农药检出限参考表
农药名称 | 检出限 (mg/kg) | 农药 名称 | 检出限 (mg/kg) | 农药 名称 | 检出限 (mg/kg) |
甲氨磷 | 1.7 | 乙酸甲胺磷 | 3.5 | 久效磷 | 2.5 |
对硫磷 | 1.7 | 敌敌畏 | 0.3 | 甲萘盛 | 25 |
水胺硫磷 | 3.1 | 敌百虫 | 0.3 | 好年冬 | 1.0 |
马拉硫磷 | 2.0 | 乐果 | 1.3 | 呋喃丹 | 0.5 |
氧化乐果 | 2.3 |
2. 速测卡法符合率：在检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。
3. 葱、蒜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理样品时，可采取整株(体)蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株(体)蔬菜浸提法，减少色素的干扰。
4. 当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指(体温)捏3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓冲溶液加得少、预反应后的药片表面不够湿润；二是温度太低。
5. 红色药片与白色药片叠合反应的时间以3min为准，3 min后的蓝色会逐渐加深，24h后颜色回逐渐退去。
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