实验概要
固有层(LP)CD11c抗原递呈细胞，直接获取管腔内容物，并能直接控制CD4T细胞分化成Th1细胞，TH2或Th17细胞。小鼠LP CD11c 细胞由三个子类的细胞组成，区分于不同的细胞表面标志物，如CD11b，CD70，CX3CR1，CD103。据报道，每个子类都有其独特的使命。使用本方法分离LP CD11c 细胞，具有产量高，可行性好和纯度高的优点。
主要试剂
戊巴比妥钠(Nembutal，50毫克/毫升)
Hank’s平衡盐溶液(HBSS)
EDTA
RPMI 1640
胎牛血清
胶原酶Ⅱ(Invitrogen公司)
Dispase酶(Invitrogen公司)
DNA酶Ⅰ(罗氏诊断)
CD11c微珠(美天旎生物技术，Miltenyi Biotec)
主要设备
软管泵P-1型(法玛西亚精细化工，Pharmacia fine chemicals)
21号蝴蝶针
迷你Beadbeater珠磨机(BioSpec)
40微米细胞过滤器(BD)
磁性细胞分离机(MACS，Miltenyi Biotec)
实验步骤
1. 用稀释10倍的戊巴比妥钠(250μL/鼠)麻醉小鼠，并打开其腹腔和胸膜腔。
2. 将21号蝴蝶针连接到P-1型蠕动泵，通过左心室给小鼠灌注10毫升含有20 mM EDTA的HBSS。泵的初始速度应该非常缓慢，逐渐增加至高速，一直灌注直至肝脏完全失去颜色。
3. 灌注后，收集全部结肠或小肠(不收集盲肠)并纵向剪开，PBS洗去粪便。
4. 用纸巾拭干肠管，转移至2毫升螺帽管中，管中有2毫升含有2 mM EDTA的HBSS。
5. 在迷你Beadbeater中，4800 rpm处理50秒，去除上皮细胞。
6. 用PBS清洗后，在体视显微镜下用镊子除去肌肉层。
7. 切割切成小块后，组织块在25毫升含4％FBS、1 mg/mL胶原酶II、1毫克/毫升Dispase酶、40微克/毫升的DNaseⅠ和抗生素的RPMI1640中，37°C振荡水浴条件下孵育1小时。
8. 消化后，样品于1800 rpm，4°C离心5分钟。
9. 去除上清，用10ml 含有5mM EDTA的HBSS重悬，37°C孵育5分钟。
10. 将消化后组织用40微米的细胞过滤器过滤后，分离所得的细胞用MACS洗两次。
11. CD11c阳性细胞用CD11c微珠净化两次，根据说明书操作。
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