脂肪及结缔组织的染色方法

实验概要

掌握脂肪及结缔组织的染色方法。脂肪的染色方法：脂肪染色常用脂溶性色素，如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、油红O等。这类染料既能溶于有机溶剂如乙醇、丙酮，又能溶于脂肪。由于该类染料在脂质中溶解度较大，染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈染液的颜色。主要用于显示组织脏器的脂肪变性和类脂质的异常沉着。一般所说的结缔组织是指纤维性结缔组织而言，其结构特点是细胞间质内基质外含有较多的纤维成分，主要是胶原纤维、弹性纤维和网状纤维，我们仅简述这三种纤维的常见染色方法。

实验步骤

1. 脂肪的苏丹Ⅲ(Ⅳ)染色方法：
   1) 冰冻切片用70％乙醇漂洗，不超过30s。
   2) 切片入苏丹Ⅲ(Ⅳ)染液中3~15min或延长至1h。
   3) 新50％~70％乙醇分化，直至洗去切片上的浮色为止，蒸馏水洗。
   4) 用稀释1倍的明矾苏木精浅染核1min或稍长。
   5) 用滤纸将切片及周围的水分吸干。
   6) 用甘油或甘油明胶封固。
结果判定：脂肪呈桔黄色或桔红色，细胞核浅蓝色。

2. 结缔组织的常见染色方法

   1) Mallory三色染色法：常用于判定多种组织、器官的病变程度及修复情况，区分肿瘤组织中的纤维成分与平滑肌。
染色步骤：
      A. 中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
      B. 重铬酸钾液10min。
      C. 蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
      D. 酸性复红液2min，蒸馏水稍洗。
      E. 苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。
      F. 直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果判定：胶原和网状纤维呈蓝色。
   2) Van Gieson苦味酸酸性复红法：可以显示组织、器官的损伤、修复及硬化情况，特别是用于鉴别肿瘤组织中的胶原纤维与平滑肌纤维，可为诊断提供重要依据。
染色步骤：
      A. 组织切片按常规脱蜡水洗。
      B. 用Weigert苏木素液染细胞核5~l0 min。
      C. 自来水充分洗涤数分钟。
      D. 用显微镜检查细胞核的着色程度，过深可用0.5%盐酸乙醇分化。
      E. 自来水洗至变蓝；用蒸馏水洗。
      F. 用Van Gieson液染1~5 min。
      G. 倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。
      H. 无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果判定：胶原纤维呈深粉红色，肌纤维、胞浆及红细胞黄色，细胞核呈棕黑色或兰黑色。
   3) 网状纤维染色－Wider染色法：可以用来显示病变组织网状支架的破坏情况。特别是在肿瘤病理诊断中，网状纤维染色对于鉴别来源于上皮组织和间叶组织的恶性肿瘤具有重要价值。
染色步骤：
      A. 组织切片脱蜡至水。
      B. 10%磷钼酸，2~5min。蒸馏水冲洗，5min。
      C. 1%硝酸铀，5s。蒸馏水冲洗，10s。
      D. 氧化银溶液，5~10min。
      E. 95%乙醇速洗，1~2s。
      F. 还原液还原，1~2s。蒸馏水冲洗，2min。
      G. 0.2%氯化金调色，2~20s。蒸馏水冲洗，5min。
      H. 5%次亚硫酸钠，2min。蒸馏水冲洗，2min。
      I. 核固红染细胞核，5~10min。水稍洗。
      J. 常规无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果判定：网状纤维呈黑色、细胞核呈红色。