脂肪酸的β-氧化

一、实验目的 
（1）了解脂肪酸的β-氧化；

（2）通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化的方法及原理。

二、实验原理

根据β—氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。

本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下：

2NaOH+I₂→NaIO+NaI+H₂O

CH₃COCH₃+3NaOI→CHI₃+CH₃COONa+2NaOH

                            碘仿               

剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。

NaOI+NaI+2HCl→I₂+2NaCI+H₂O   I₂+2Na₂S₂O₃→Na₂S₄O₆+2NaI

根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。

三、试剂与器材 
恒温水浴、微量滴定装置、解剖用具、玻璃器皿等。

Locke氏溶液、0.1mol/L碘溶液、pH7.6,mol/L的磷酸缓冲液、

0.2mol/L丁酸溶液、15%三氯乙酸溶液、10%氢氧化钠溶液、10%盐酸溶液。

四、操作方法 
处死动物→制备肝糜→丁酸氧化反应→碘仿反应→碘滴定

五、关键步骤与注意事项

① 用新鲜肝糜进行实验，确保肝内酶活力。

② 注意滴定终点的控制，保证实验的准确度。