让基因沉默提高酵母中的蛋白质产量

　　通过使基因沉默，研究人员成功地显著增加了酵母中的蛋白质产量。该方法可为制药蛋白和工业酶生产工业产出更好的工程化菌株。

　　来自丹麦科技大学诺和诺德基金会生物可生化性中心、查尔默斯技术大学和KTH皇家理工学院的研究人员已经鉴定出9个基因靶点，通过组合沉默使工程酵母细胞中的蛋白质产量提高了2.2倍。

Guokun Wang

　　“这个概念可以推广到其他酵母蛋白生产者，甚至一些丝状真菌和哺乳动物细胞工厂。任何一个与高级蛋白质生产者合作的组织都可以利用这些发现，”来自诺和诺德基金会生物可生化性研究中心的第一作者、博后Guokun Wang说。

　　本文提高了一种模型蛋白，α-淀粉酶（α-amylase）的酵母生产，证明了细胞内目标蛋白（重组蛋白）的总生产价值。

　　沉默是一种强有力的工具

　　通过RNA干扰（RNAi）确定几种适合沉默的基因靶点，获得优化的酵母菌株。通过构建与基因互补的短/长链RNA，干扰RNA与互补的mRNA相互作用并引导其降解，从而减少需要翻译的mRNA，降低靶基因的表达。

　　RNAi介导的表达下调是一个有效的合理筛选新基因靶点的有力工具，因为它既便宜又快速。

　　广泛的文库筛选确定了9个目标基因

　　通过观察α-淀粉酶分泌的增强作为重组蛋白生产改善的指标，研究人员分析了酵母中大约243000种沉默效应物。

　　通过对含有分泌这种酶的单个细胞的微小液滴进行广泛筛选，研究人员成功地筛选出了9个基因，这些基因受抑制后，改善了蛋白质的分泌。这些基因参与细胞代谢、细胞周期以及蛋白质修饰和降解。

　　所有这些基因在不同的下调水平表达时都会影响重组蛋白的产生。Guokun Wang说：“在试图建立用于生产工业酶或生物制药蛋白的优化酵母细胞工厂时，这些知识非常重要。”

　　科学家们首先筛选出有益的RNAi目标。之后，他们研究了沉默的组合，得出了所谓的半理性方法（semi-rational approach）。这项研究现已发表在PNAS上。