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中性粒细胞数量减少和功能失调的检测方法及临床意义(2)

2019.4.29
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玉芳

致力于为分析测试行业奉献终身

 2. 结合功能检测 在内皮细胞上表达的L-选择素/唾液糖蛋白,VLA-4/VCAM,CR3/纤维素等大量粘附分子,能与活化的中性粒细胞上的相应配体强合。有报道将单细胞层的内皮细胞作为生理性底物,在类似Borden小室的装置中,经一定的反应时间后,计数滤膜上皮内皮细胞结合的中性粒细胞数,作为其结合能力的测定指标。内皮细胞用白细胞介素-1(IL-1),脂多糖(LPS),肿瘤坏死因子(TNF)α预处理后,或是在滤 膜下放置吸引剂,都可以使移动和结合作用增强。

  3. 吞噬功能的检验 将中性粒细胞与已标记台盼蓝染料的细菌共温,经洗涤除去未摄入的细菌,再计数吞噬细菌的中性粒细胞数。运用这项技术既能解释抗体、补体成分、血浆蛋白在吞噬作用中的重要性,又能获知病人血清的调理功能。

  4. 杀伤功能的检测 中性粒细胞可通过溶酶体酶对吞入胞内的病原体或颗粒进行消化降解。胞内杀菌机制复杂,目前认为真正的杀菌过程,是通过胞浆内的氧依赖性及氧非依赖性胞内杀菌两条途径来完成。当吞噬细胞吞噬异物颗粒后,胞内代谢常由无氧酵解转化成有氧氧化,胞内的杀伤过程常为一耗氧过程,髓过氧化物酶(MPO)-卤素系统是起杀伤作用的重要物质。此外,吞噬细胞中低pH状态(pH约4.5)常限制细菌活力,溶酶体酶可溶解革兰氏阳性细菌的细胞壁,它们与胞内阳离子蛋白,转铁蛋白,吞噬素等构成了氧非依赖的胞内杀伤途径。

  检测杀菌功能可用化学发光法。中性粒细胞在吞噬业经调理的金黄色葡萄球菌过程中,伴有化学发光产生。其氧代谢活性与细菌的吞噬密切相关,杀菌能力与发光强度相平行。Martin 和Bhakdi就是利用上述方法,在生理温度和中性环境下,通过化学发光仪检测中性粒细胞对金黄色葡萄球菌的调理吞噬和杀伤作用。另外,Hamers等用组合试验测定中性粒细胞对大肠埃希菌的吞噬、杀伤和降解。在该试验中他们用大肠埃希菌ML35突变株。如果中性粒细胞内大肠埃希菌被杀死,则可测出β-半乳糖苷酶的活性。

  中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗骤增,耗氧量也相对增加。借助DADPH氧化酶,O2降解为O2-,O2-随后转化为H2O2。因此临床也常用硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验来检测中性粒细胞的胞内杀菌能力。当磷酸已糖旁路谢活力增强,葡萄糖6-磷酸氧化脱氢时,加生产方式NBT接受所脱的氢,使原先呈淡苋色的NBT还原成点状或块状颗粒并沉积在胞浆内。

  在氧非依赖的胞内杀伤途径中,存在于中性粒细胞嗜天青颗粒中的阳离子蛋白,如酪蛋白钙,也能对病原体起到杀伤作用,因此可利用钙螯合物染料与钙离子结合后发出的荧光来测定细胞内游离的钙离子渡 度。最常用的染料有用于分光光度计的吲哚-1和用于流式细胞仪的荧光-3。Roos等将带有趋化吸引剂的中性粒细胞温育后,发现钙离子浓度迅速升高。由于细胞内储存的钙被释放,形成第一个浓度高峰。紧接着又由于细胞外钙的流入,形成第二个峰。

  5. 降解功能的检测 降解过程即浆膜对细胞内颗粒消化的过程,这个过程可测定上清液里中性粒细胞的颗粒酶活性,或计数中性粒细胞表面的颗粒膜蛋白。后者主要用弹性蛋白酶(结合O1-抗胰蛋白酶)和乳酸合成酶分别标记由嗜天青特异性颗粒释放的蛋白。Kuijpers等在实验中发现十四酸盐乙 酸盐(PMA)和N-甲酰-蛋氨酰亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)只能降低浆膜对特异性颗粒的消化能力。而fMLP结合了松弛素B后,能同时降低浆膜对特异性颗粒和嗜天青颗粒的消化。

  6. 其他检测 测定针对中性粒细胞功能活性的信号传导途径,或用单克隆抗 体测定中性粒细胞表面受体和结合蛋白的表达。如Fc受体和β1、β2整合素。

  此外,用流式细胞仪测定聚合或丝状的肌动蛋白量可了解中性粒细胞状态结构的改变,如先用PMA诱导,可使丝状肌动蛋白迅速而持久地升高,更有助于提高检测技术敏感性。

  因此,上述针对中性粒细胞各项功能检测方法将有助于临床医生及时发现病人的中性粒细胞缺少及功能失调的疾病,尽早采取措施,防止其发生感染。


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