基本方案
实验方法原理 |
L-天冬氨酸酰胺水解酶。 L-天冬酰胺+H2O → L-天冬氨酸+NH3 酶的测定是通过确定 Nessler's 试剂释放的氨气来实现的。一个单位的定义:在 37℃、pH 8.6 时,释放每分钟 1 umol NH3 的酶量。 |
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实验材料 | L-天冬氨酸酰胺水解酶 |
试剂、试剂盒 | Tris-HCl L-天冬酰胺溶液 三氯乙酸 Nessler's 试剂 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 1. 样品和对照组的溶液: 2. 离心 5 min 0.5 ml 上清 7.0 ml H2O 1.0 ml Nessler’s 试剂 室温放置 10 min,记录 480 nm 吸收值 3. 通过硫酸铵标准曲线定量 NH3 浓度。 4. 计算
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注意事项 | |
其他 |
试剂: 0.05 mol/L Tris-HCl,pH8.6 0.01 mol/L L-天冬酰胺溶液(天冬酰胺,含 1 分子水,Mr=150.1;150 mg 溶于 100 ml 0.05 mol/L Tris-HCl,pH 8.6) 1.5 mol/L 三氯乙酸(TCA,Mr=163.4;24.5 g 溶于 100 ml 水中) Nessler's 试剂
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