天冬酰胺酶的测定

实验方法原理

L-天冬氨酸酰胺水解酶。

L-天冬酰胺＋H2O → L-天冬氨酸＋NH3

酶的测定是通过确定 Nessler's 试剂释放的氨气来实现的。一个单位的定义：在 37℃、pH 8.6 时，释放每分钟 1 umol NH3 的酶量。

实验材料 L-天冬氨酸酰胺水解酶

试剂、试剂盒 Tris-HClL-天冬酰胺溶液三氯乙酸Nessler's 试剂

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

1. 样品和对照组的溶液：

2. 离心 5 min

0.5 ml 上清

7.0 ml H2O

1.0 ml Nessler’s 试剂

室温放置 10 min，记录 480 nm 吸收值

3. 通过硫酸铵标准曲线定量 NH3 浓度。

4. 计算

注意事项

其他

试剂：

0.05 mol/L Tris-HCl，pH8.6

0.01 mol/L L-天冬酰胺溶液（天冬酰胺，含 1 分子水，Mr＝150.1；150 mg 溶于 100 ml 0.05 mol/L Tris-HCl，pH 8.6）

1.5 mol/L 三氯乙酸（TCA，Mr＝163.4；24.5 g 溶于 100 ml 水中）

Nessler's 试剂