HPLC测定双黄连口服液中黄芩苷含量的解决方案

方案优势     

结果分离效果好，快速准确，重现性好，可用于本制剂的质量控制。            

采用标准

国家相关标准

方法/原理/步骤     

　　试药

　　黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号200512)；双黄连口服液(哈高科白天鹅药业集团有限公司，批号05117-1；江苏吴中实业股份有限公司苏州长征制药厂，批号050114；中国黑龙江完达山制药，批号050301)；甲醇(色谱纯)、冰乙酸(AR)，重蒸水。

　　试验方法和结果

　　1.对照品液的制备

　　精密称取黄芩苷对照品20.60mg，置200ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.标准曲线

　　精密吸取上述对照品溶液0.25ml，0.50ml，0.75ml，1.00ml，1.25ml，1.50ml，1.75ml，2.00ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。进样20μl，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制回归方程：Y=6535.7X+9508(r=0.9995)，结果黄芩苷在25～220μg范围内呈良好的线性关系。

　　3.精密度试验

　　分别精密进对照品溶液20μl，重复进样6次，按上述色谱条件记录峰面积，结果RSD%=0.89%。

　　4.样品分离度

　　按样品测定法制备供试液进样20μl，记录色谱图，结果峰与相邻杂质峰分离完全，分离度≥2.5。

　　5.重现性试验

　　取同一批样品(05117-1)，按样品测定法制备供试液，在上述色谱条件下进行5次平行测定，结果RSD=1.56%，表明本法测定的重现性好。

　　6.稳定性试验

　　取批号05117-1的供试品溶液，分别在制备后0，2，4，8，12h测定，结果黄芩苷的峰面积RSD=1.82%，表明溶液基本稳定。

　　7.阴性干扰实验

　　取阴性对照样品(按《中国药典》2000版一部缺黄芩苷制剂)，精密进阴性对照品溶液20μl，按上述色谱条件记录色谱图。结果黄芩苷对照品相应无干扰峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无干扰。

　　8.回收率试验

　　采用加样回收法。精密量取已知含量的样品1ml，置50ml量瓶中，分别精密加入浓度为10.30mg/ml；黄芩苷对照品溶液1ml，2ml，3ml，加50%甲醇稀释至刻度。进样20μl，测定峰面积，计算回收率。

　　9.样品测定

　　精密量取各样品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用45μm液膜过滤，滤液即为供试品溶液，在上述色谱条件下，进样20μl，记录峰面积，计算黄芩苷含量。

仪器设备

    仪器

    美国SSI Ⅳ型液相泵，M525紫外检测器，Anastar色谱工作站；赛多利斯BP-211D电子天平。

    药典流动相样品的HPLC色谱条件

    色谱柱：Kromasil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)；流动相：甲醇：水：冰乙醇(60：50：1)；流速1.0ml/min；检测波长274nm，柱温40℃。               

结论    

　　本法测定双黄连口服液的黄芩苷的含量，操作简单易行，以甲醇：水：冰乙酸(60：50：1)为流动相，样品中黄芩苷与杂质峰完全分离，出峰时间短，峰形稳定，进样量在20～220μg范围内呈良好线性，回收率高且稳定，可以选定上述色谱条件的流动相，作为该制剂黄芩苷的含量测定。