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紫外分光光度法对黄芩总黄酮的提取工艺研究

2018.8.07
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黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi为常用中药之一,具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。其主要有效成分为黄酮类化合物。现代药理研究证明黄芩不仅具有明显的抗菌消炎、抗过敏、抗氧化、抗癌和抗病毒等作用,而且对心血管疾病也具一定的作用。从黄芩中提取黄芩苷的工艺研究报道大多以水为溶剂进行煎煮提取,但此法黄芩苷的收率低,生产周期长。本研究采用正交实验,总黄酮为指标,对各影响因素进行研究,得到较佳的提取工艺,较大地提高了收率。

 

1材料与仪器

      1.1材料药材:黄芩;试剂:黄芩苷标品;甲醇;甲醇;磷酸。

      1.2仪器:UV-1500PC紫外分光光度计(美析(中国)仪器有限公司)。

 

2方法与结果

      2.1黄芩总黄酮标准曲线的制作精密称定3mg的干燥至恒重的黄芩苷标品,用甲醇定容于100ml容量瓶中,摇匀,作为对照品溶液,备用。用对照品溶液以甲醇为空白对照,进行190~500nm的紫外扫描。扫描结果显示在波长277.6nm处有最大吸收值,所以选择277.6nm做为检测波长。观察对照品溶液于1h内的稳定性时,变化很小,因此采用不加显色剂方法直接测定黄芩总黄酮。精密吸取对照品溶液0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml,分置10ml容量瓶中,用甲醇定容到刻度,摇匀,以0.00ml对照品溶液作空白,于277.6nm处测定吸光度(A)。以A对浓度(C)进行线性回归,其方程为Y=66.878X-0.003(R2=0.9996,r=0.9998)。

 

      2.2正交设计优化黄芩中总黄酮的提取工艺用L9(34)正交表来选择黄芩的最佳提取工艺。称取药材9份,每份50g。用30%乙醇提取,以总黄酮含量为指标,考察影响提取效果的3个因素:溶剂用量、最佳提取时间、提取次数。每份药材提取后过滤,合并滤液,定容于277.6nm处测定吸光度(A),测定提取物中总黄酮的含量。

 

      3结果分析从正交分析结果及方差分析表来看,各因素对黄芩中总黄酮含量的影响程度为C>A>B,且C为极显著性差异因素,A、B为显著性差异因素,C3>C2>C1,A1>A2>A3,B3>B2>B1,最佳提取条件为A1B3C3,即溶剂用量(12,10,10),提取时间(2,1,1)h,提取3次为最佳提取工艺条件。

 

      4讨论分光光度法测定黄酮含量的常用方法有直接测定法、Al(NO3)3法和AlCl3法,为了选择合适的测定方法,我们用对照品溶液以甲醇为空白对照,进行190~500nm的紫外扫描。扫描结果显示在波长277.6nm处有最大吸收值,峰形好,所以选择277.6nm做为检测波长。进一步观察对照品溶液于1h内的稳定性时,变化很小,因此采用不加显色剂方法直接测定黄芩总黄酮。

 

        根据实验结果本实验优选的最佳工艺为:提取溶剂为30%乙醇,提取3次,分别加12,10,10倍量溶剂,提取时间2,1,1h。为了验证这一结果,取3份药材,每份50g,按照所选的提取工艺:提取溶剂为30%乙醇,提取3次,分别加12,10,10倍量溶剂,提取时间2,1,1h。最后得到总黄酮含量分别为19.03%,18.65%,19.48%。通过验证实验,总黄酮的提取效率都得到了比较好的结果。说明所选的工艺是稳定而有效的,适合继续放大生产。

 


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