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沙门氏菌显色培养基的快速检测与分离应用

2019.9.24
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

  沙门氏菌属是一大群寄生于人类和动物肠道内,生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌,有的专对人类致病,有的只对动物致病,也有对人和动物都致病,这些统称为沙门氏菌。

  沙门氏菌目前已经发现1800种以上,按抗原成分可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌型。其中与人类疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌,乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌,丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌,丁组的伤寒和肠炎杆菌。

  此菌可引起禽伤寒、鸡白痢、猪霍乱、鼠伤寒沙门氏菌病、猪副伤寒、马流产沙门氏菌病等疾病。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌,其次是鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌。

  感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品,可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。

  原理:

  蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;抑菌剂抑制革兰氏阳性菌,增强培养基的抑制杂菌的能力;混合色素分别与沙门氏菌和大肠菌群所对应的酶发生特异性反应,水解底物,释放出显色基团,在淡黄色平板上沙门氏菌产生品红色的菌落,大肠菌群产生蓝绿色的菌落。

  培养基配方(每升):

  蛋白胨19.6g

  酵母膏粉3g

  氯化钠5g

  抑菌剂1.5g

  琼脂12g

  混合色素6.4g

  最终pH 7.0±0.2

  使用方法:

  1、称取本培养基47.5g,用1000ml蒸馏水或纯水溶解,混合均匀加热至100℃,并按常规不断搅拌直至完全溶解(不能持续高温加热,建议不要重复煮溶),不需高压灭菌,冷至50℃,倾注灭菌平皿。

  2、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液与增菌液。

  3、建议使用二步增菌法:

  (1)前增菌:将处理过的样品25g置于225mL缓冲蛋白胨水中,混合均匀后37℃培养6~8h;

  (2)选择性增菌:取前增菌液1mL加入到9mL四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)中,混合均匀后37℃培养18~24h;

  4、用接种环取增菌液一环,划线接种于沙门氏菌显色平板上,置于36±1℃培养18-24小时。

  5、观察结果。挑取显色平板上呈品红色,扁平透明,边缘光滑,直径约2mm的可疑菌落进行进一步的试验。

  6、可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管试验,对疑似沙门氏菌菌落进行生化鉴定。

  质量控制:

  本品倾注平皿后呈淡黄色,下列菌株接种后于36±1℃培养18—24h生长情况如下表。

菌 名        菌 号    生长状况   培养特征

  鼠伤寒沙门氏菌  CMCC50115    良好    菌落品红色

  大肠埃希氏菌   ATCC25922   良好    菌落蓝绿色

  奇异变形杆菌  CMCC(B)49005   良好    菌落无色

  粪肠球菌     ATCC29212   受抑制    ----

  贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期二年。

  规 格:可配置1L的培养基干粉。


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