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提早知道所培养细胞或培养基中是否有细菌污染一种方法

2021.5.30
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空空

好好工作,天天开心

培养细胞时,要避免细菌污染。如果存在细菌污染,则培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显,细胞大多在24小时死亡。在以细胞大规模培养为基础的生物药产业中,也需要进行无菌检查。传统无菌检查是采用TSA或TSB培养基培养的方法,一般需要培养14天,观察是否有菌落生长或溶液浑浊。

现介绍一种通过PCR进行无菌检查的方法,当然该方法也是用于研究。即采用德国MB的细菌检测试剂盒(Onar Bacteria Detection Kit)。它作为PCR试剂盒,针对的是细菌高度保守的16S rRNA序列,阳性产物片段大小为467 bp,可跑胶后在紫外灯下观察。另包含一个内控对照,用于检测PCR反应是否正常,该内控对照条带为140 bp。

需要注意的是,样品在检测前,应在95 °C做热灭活 5分钟,之后每个PCR反应是加5ul。另外,细胞培养液中应不含抗生素,细胞应在不含抗生素的培养基中培养一代,因为抗生素会使细菌水平保持在检测限以下(2.4×10的3次方/ml)。另外,检测时应做复孔。整个反应体系为25ul。

该试剂盒可检测的细菌包括:假单胞菌,放线菌,大肠埃希氏菌,沙雷氏菌,卟啉单胞菌,梭菌,葡萄球菌,链球菌,乳杆菌,微球菌,芽孢杆菌,克雷伯菌,沙门氏菌,肠球菌,分枝杆菌,军团菌,葡萄球菌,消化链球菌。它不检测真菌、病毒和真核细胞DNA。


 


丁香通
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