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微生物检测法，依照的是维生素是细菌生长的必要条件这一基本规律，利用酪乳酸杆菌的生长繁殖与培养基中叶酸含量成正比的关系，通过分光光度计以光密度测定细菌增殖的量，间接计算出样品中叶酸的含量。因此，微生物检测法也能够用于检测多种衍生物总和。在我国范围内，GB5413标准规范规定：在目前的技术条件下，测量叶酸、泛酸、维生素B12以及烟酰胺等的含量都可以利用微生物检测法进行确定。而在国际上，对叶酸的检测方法也是通过微生物检测法进行确定的。
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