酶消化法
实验方法原理 |
取材于出生2~3 d 小鼠颅骨,以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养,采用胶原酶消化法分离成骨细胞,并进行细胞接种与传代。采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞是一种可靠、简便、快速的细胞原代分离培养方法。 |
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实验材料 | SD大鼠 |
试剂、试剂盒 | F12 完全培养液 胰蛋白酶 Ⅱ型胶原酶 酒精 |
仪器、耗材 | 手术器械 磁力搅拌器 |
实验步骤 |
一、实验步骤 二、结果
图1:成骨细胞 图2:成骨细胞100倍 三、鉴定的方法
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注意事项 |
1. 自取材开始,保持所有组织细胞处于无菌条件。细胞计数可在有菌环境中进行。 2. 在超净台中,组织细胞、培养液等不能暴露过久,以免溶液蒸发。 3. 凡在超净台外操作的步骤,各器皿需用盖子或橡皮塞盖住,以防止细菌落入。 4. 操作前要洗手,进入超净工作台后要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦拭手。试剂瓶口也要擦拭。 5. 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼。金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,且冷却后才能夹取组织。吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。 6. 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。 7. 不能用手触及消毒器皿的工作部分,工作台面上的用品摆放要布局合理。 8. 瓶子开口后要尽量保持45°斜位。 9. 吸溶液的吸管等不能混用。
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其他 |
一、讨论 成骨细胞包绕在硬组织中,致使处理困难,可采用骨组织块法、酶消化法、骨膜组织块法、 骨髓培养法以及薄层骨片经 EDTA 处理并经胶原酶消化,均可培养出成骨细胞。体外培养的成骨细胞保持 有骨组织细胞的某些特征。据文献报道,不同方法培养的成骨细胞形态是不同的[1]。
二、文献 展开 |