ATP储存液的配制
依赖环核苷酸的蛋白质激酶
蛋白质激酶C
酪蛋白激酶
酪氨酸激酶
凝胶蛋白质激酶分析
试剂、试剂盒 | ATP储存液 |
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实验步骤 | 一、Mg-ATP 储存液的配制 ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。 1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO4 2. 20 mmol/L Na2-ATP 以 1:1 的比例混合这两种溶液,测 pH 值。慢慢将 pH 值调至 pH 7.4。如果出现沉淀,应继续搅拌,并要保持 pH 值在 pH 7.4。这就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 储存液。将溶液分成小份保存于 -20℃,可以放一年以上。 二、[γ-32P] ATP 使用液的配制 [γ-32P] ATP 供应商有 Amersham Int、NEN 和 ICN;通常可以买到不同比活性的 [γ-32P] ATP。适宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol,通常刚买来时的浓度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-32P] ATP 溶液用起来很方便,因为它可以保存于 4℃ 而不是 -20℃。 |