人β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）试剂盒使用说明

检测范围：  96T

6μg/L -160μg/L

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平。用纯化的人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)，再与HRP标记的人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)浓度。 

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)试剂盒使用说明书试剂盒组成：

1    30倍浓缩洗涤液    20ml×1瓶    7    终止液    6ml×1瓶

2    酶标试剂    6ml×1瓶    8    标准品（320μg/L）    0.5ml×1瓶

3    酶标包被板    12孔×8条    9    标准品稀释液    1.5ml×1瓶

4    样品稀释液    6ml×1瓶    10    说明书    1份

5    显色剂A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2张  

6    显色剂B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1个

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。160μg/L    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

80μg/L    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

40μg/L    3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

20μg/L    2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

10μg/L    1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

温育：操作同3。

洗涤：操作同5。

显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。