12 数据处理和结果判断
记录受试物各剂量组、空白对照(自发回变)、溶剂对照以及阳性诱变剂对照的每皿回变菌落数,并求平均值和标准差。
如果受试物的回变菌落数是溶剂对照回变菌落数的两倍或两倍以上,并呈剂量-反应关系者,则该受试物判定为致突变阳性。
受试物经上述四个试验菌株测定后,只要有一个试验菌株,无论在加S9或未加S9条件下为阳性,均可报告该受试物对鼠伤寒沙门氏菌为致突变阳性。如果受试物经四个试验菌株检测后,无论加S9和未加S9均为阴性,则可报告该受试物为致突变阴性。
13 试验报告
试验报告应包括以下内容:
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、使用溶剂;
(2)试验菌株:所用试验菌株;
(3)代谢活化系统:所用诱导剂;
(4)试验方法:简述操作步骤,除受试物剂量分组外,还应说明空白对照、溶剂对照和阳性对照,阳性结果判定标准;
(5)结果:以列表方式报告受试物的Ames实验结果(表1);
(6)结论。
表1 Ames试验菌株的回变结果(平均值±标准差)
组别 | 剂量 (mg/皿) |
TA97 -( S9) +( S9) |
TA98 -( S9) +( S9) |
TA100 -( S9) +( S9) |
TA102 -( S9) +( S9) |
受试物 | |||||
自发回变 | |||||
溶剂对照 | |||||
阳性物对照 |
Ames试剂盒
本试剂盒省去了培养基成分准备、诱导 S9 制备、菌株 鉴定、菌株培养等时间,可以直接使用,大大缩短了实验周期;试剂盒各成分均经过严格的质量检测,无杂菌污染,菌株特性与活菌数目以及诱导 S9 活性均符合 Ames 试验要求,实验结果准确、可靠、重现性高。Ames试剂盒应用广泛,可进行食品与饮用水、化学品、洗涤剂、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装材料等多个方面的遗传毒理学检测。
包装盒 | 产品组成 | v5.1(4菌) | V5.2(5菌) | 使用说明 | 保存条件 | ||
规格 | 数量 | 规格 | 数量 | ||||
A盒 | 琼脂粉Agar | 66g | 1 | 80g | 1 | 室温 |
|
底层培养基GS | 100mL | 1 | 100mL | 1 | 使用前混匀 | ||
氯化钠 | 3g | 1 | 3g | 1 | |||
2-氨基芴 | 1mL | 1 | 1mL | 1 | 200μg/mL,使用前混匀 | ||
甲基磺酸甲酯 | 1mL | 1 | 1mL | 1 | 使用前加1 mL灭菌蒸馏水混匀,浓度10μL/mL | ||
敌克松 | 1mL | 1 | 1mL | 1 | 500μg/mL,使用前混匀 | ||
叠氮钠 | / | / | 0.5mL | 1 | 15μg/mL,使用前混匀 | ||
2-氨基蒽 | / | / | 0.5mL | 1 | 20μg/mL,使用前混匀 | ||
S9反应液 | 42mL | 1 | 42mL | 1 | 使用前混匀 | ||
底层培养基VS | 100mL | 1 | 100mL | 1 | 使用前混匀 | ||
B盒 | HB溶液 | 2.5mL | 1 | 2.5mL | 1 | 使用前混匀 | -80℃下长期保存,可保存6个月。-20℃可短期保存3周。请勿反复冻融。 |
1,8-二羟基蒽醌 | 0.5mL | 1 | 0.5mL | 1 | 1mg/mL,使用前混匀 | ||
S9 混合物 | 1.4mL | 5 | 1.4mL | 6 | 使用前加2.86 mL冰冷灭菌蒸馏水复溶 | ||
TA97菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | 使用前混匀 | ||
TA98菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | |||
TA100菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | |||
TA102菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | |||
TA1535菌株 | / | / | 5.0mL | 1 |
诱导 S9 采用国际先进无菌冻干干燥工艺制成,实现了诱导 S9 酶活性的稳定保存,同时有效防止了细菌污染。实验时用 S9 反 应液溶解混匀。
2. 实验菌株采用先进工艺规模化制备,出厂前经过严格的质量检测,低温贮存条件确保了实验菌株的长期稳定性。实验时混 匀后即可直接使用,节省了菌株鉴定、活化处理以及菌液浓度调整等时间。
3. 实验阳性对照试剂种类覆盖整个 Ames 实验要求,在添加和不添加 S9 的情况下均可以诱导实验菌株呈现阳性反应。阳性对照 试剂采购自国际大品牌公司,按照 Ames 实验需求精准定量分 装,出厂前经过实验检测,阳性对照试剂的长期稳定性有质量 保证。
4. 底层培养基 VS、GS 以干粉形式提供,便于培养基长期稳定 保存。使用前只需添加蒸馏水灭菌处理即可,试剂瓶采用耐高 温材料,因此可以直接向试剂瓶中添加所需剂量的蒸馏水。
5. 顶层培养基 HB 冻干球采用先进无菌冻干干燥工艺制成,使用前需先用灭菌蒸馏水溶解,然后用 0.22μm 滤膜过滤除菌。
试剂盒应用范围
本试剂盒应用范围非常广,可进行食品与饮用水、化学品、洗涤剂、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装 材料等遗传毒理学检测。
传统实验操作不足
周期长——培养基成分准备、诱导 S9 制备、菌株鉴定、菌株培养 等耗费大量时间。 稳定性差——杂菌污染、活菌数不符合要求、实验试剂配制不准 确等都会导致实验失败。
试剂盒优势
便捷—— 本试剂盒省去了培养基成分准备、诱导 S9 制备、菌株 鉴定、菌株培养等时间,可以直接使用,大大缩短了实验周期。 准确——本试剂盒各成分均经过严格的质量检测,无杂菌污染, 菌株特性与活菌数目以及诱导 S9 活性均符合 Ames 试验要求,实 验结果准确、可靠、重现性高。
稳定—— 本试剂盒稳定性强、易于运输和保存。
试剂盒使用操作流程
实验器材、试剂准备:三角瓶、5mL 或 15mL 试管、100μl 和1000μl 枪头、0.22μm 滤膜、注射器、平皿、二甲基亚砜、灭菌 蒸馏水等;
2. 设置待测物剂量,配制各剂量无菌待测物溶液;
3. VS、GS 培养基加水溶解并灭菌,配制底层培养基;
4. HB 球加灭菌蒸馏水溶解,充分混匀,然后过滤除菌;
5. 实验当天配制顶层培养基,2ml 分装,然后 45℃水浴保温;
6. 用无菌蒸馏水溶解 S9 复合物并配制 S9 反应混合液;
7. 开展 Ames 实验,将 2mL 顶层培养基+100μL 菌液+100μL 待测 物或阳性底物+500μL10% S9 混合液混匀,倾倒于底层培养基(实验室温度低时倾倒的顶层培养基易冷凝,可将底层培养基 放置于 37℃培养箱一段时间,然后再倾倒顶层培养基);
8. 待顶层培养基冷凝后,将实验平皿放入 37℃培养箱,培养 48h后观察实验结果;
试验方法
试验方法主要是平板掺入法和预培养平板掺入法,具体操作如下:
平板掺入法
a) 准备所需底层培养基平皿若干。
b) 融化顶层培养基分装于无菌小试管,每管2 mL,在45℃水 浴中保温。
c) 在保温的顶层培养基中依次加入测试菌株菌液0.1 mL,混 匀;加受试物0.05 mL~ 0.2 mL(一般加入0.1 mL。需活化时 另外再加入10 % S9反应混合液 0.5 mL),再混匀,然后迅 速倾入底层培养基上。转动平皿,使顶层培养基均匀分布 在底层上,平放固化,37℃ 培养 48 h观察结果。
d) 另做一阳性对照、溶剂对照和未处理对照。阳性对照不加 受试物,只加标准诱变剂(即试剂盒阳性对照试剂,见表2);溶剂对照加除受试物和标准诱变剂以外的所有试剂, 如溶剂二甲基亚砜等(光谱纯或分析纯);未处理对照只 在培养基上加菌液;其他方法同上。
2. 预培养平板掺入法 预培养对于某些受试物可取得较好效果。因此可根据情况确定 是否进行预培养。在加入顶层琼脂前,先进行以下预培养步骤:在试验中,将受试物(需活化时另加入10% S9反应混合 液)和菌液,在37℃中培养20min,或在30℃中培养30min,然 后再加2mL顶层琼脂,其他同上述平板掺入法。