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34招教你学会实验室常用贮存液的配制(三)

2020.2.16
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

21 酚/氯仿溶液

  『配制方法』

  把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L TriHCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Trisl(pH7.6)液层,保存于4℃.

  〖注意〗

  酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服.所有操作均应在化学通风橱中进行.与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇.

  22 苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液.

  『配制方法』

  用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃.如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L).

  〖注意〗

  PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之.被PMSF污染的衣物应予丢弃.PMSF在水溶液中不稳定. 应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中. PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃. pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃.

  23 磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

  『配制方法』

  在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min. 保存于室温.

  24 1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液

  『配制方法』

  将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃.

  25 乙酸钾溶液(用于碱裂解)

  『配制方法』

  在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液.

  26 乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

  『配制方法』在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌.

  27 5mol/L NaCl溶液

  『配制方法』

  在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌.

  28 10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

  『配制方法』

  在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用.

  〖注意〗SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌

  29 20×SSC溶液

  『配制方法』

  在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌

  30 20×SSPE溶液

  『配制方法』

  在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分装后高压灭菌.

  31 100%三氯乙酸溶液

  『配制方法』

  在装有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA.

  32 1mol/L Tris溶液

  『配制方法』

  在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值. 应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1L,分装后高压灭菌.

  〖注意〗

  如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris. Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1℃,pH值大约降低0.03个单位. 例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6.

  33 Tris缓冲盐溶液(TBS)

  『配制方法』

  在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱,加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存.

  34 X-gal溶液

  『配制方法』

  用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液.保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃. X-gal溶液无须过滤除菌.


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