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苦参碱含量的HPLC测定法

2020.3.16
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

本文采用HPLC法建立了苦参中苦参碱含量的检测方法。实验采用氨基色谱柱,以乙腈+磷酸二氢钠(80+20)为流动相,检测波长210nm,流速1ml/min,苦参碱在0.01~0.2μg范围内具有良好线性范围(R2=0.9991),RSD为0.45%(n=5)。采用HPLC法检测苦参碱简单、快速、准确,可用于质量控制。

苦参碱是豆科植物苦参干燥根的主要成分之一,其在中枢神经系统、心血管系统、杀虫抗菌、抗炎、免疫及抗肿瘤等方面有重要的药理活性。本文采用HPLC法对苦参中的苦参碱进行含量测定,方法简单快速,适用于对苦参药材的质量控制。

仪器与试剂

仪器

LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统

试剂

乙腈(色谱级);磷酸二氢钠(分析纯);去离子水;苦参碱标样:已知含量99%。

实验方法

提取方法

取苦参浸膏0.15g,加入碱性甲醇(氨水调甲醇pH值到9)5ml超声提取30min,离心取上清液。再分别加入碱性甲醇2ml,超声提取两次,离心后合并提取液,过滤,用碱性甲醇定容至10ml,提取液待用。

液相色谱条件

色谱柱:氨基柱,250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈+磷酸二氢钠(0.02mol/L)=80+20(V/V);流速:1ml/min;进样量:20μl;紫外检测器:210nm;柱温:30℃。

标准溶液的配置

称取苦参碱标准品0.05g(精确至0.0002g),置于50ml容量瓶中,用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀。用流动相乙腈+磷酸二氢钠(0.02mol/L)=80+20(V/V)稀释浓度为0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml标准液,摇匀备用。

试样溶液的配置

称取约0.02g苦参的提取液,置于50ml容量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。经0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤,滤液作为试样待进行液相色谱测定。

结果

苦参碱标准品色谱图如图1所示。

苦参碱标准品标准曲线的制备:配置不同浓度标准品进HPLC检测,绘制标准曲线,见图2。标准品浓度分别为:0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml。按色谱条件测定,以峰面积对不同浓度进行回归,得到回归方程为Y=-1.056×104+3.027×104X,R2=0.9991。峰面积与苦参碱浓度呈良好的线性关系。

苦参碱试样色谱图见图3,苦参碱试样5次重复进样,见表1。经计算,稀释试样中苦参碱的平均浓度为1.163μg/ml,见表1,重复性RSD为0.45%。计算得苦参提取液中苦参碱的浓度为2.717mg/g。

小结

本文采用HPLC法对苦参中的苦参碱进行含量测定,前处理方法简单,苦参碱在0.01~0.2μg范围内具有良好的线性范围,回归方程为Y=-1.056×104+3.027×104X,R2=0.9991,重复性良好,RSD=0.45%(n=5),苦参提取液浓度为2.717mg/g。HPLC法对苦参碱含量测定的方法准确、快速,可有效应用于苦参药材的质量控制。


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