卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将LC-MS/MS检测食品中氯霉素残留的方法公布如下：
1. 适用范围
本方法适用于食品中氯霉素残留的检测。
2. 提取
称取相当于原始样品5g(精确至0.01g)的制备好的试样，置于50 mL具塞离心管中，准确加入100μL氯霉素-d5(200ng/mL)内标溶液，加入15 mL乙酸乙酯，振荡10 min，以3000 r/min离心10 min，吸取上层乙酸乙酯，置于50mL具塞离心管或25mL玻璃刻度离心管中,再加10mL乙酸乙酯提取第二次，合并提取液，在45°C±5°C,水浴用氮气吹干仪吹干待净化。
a. 对于含脂肪量底低的样品,加入2 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL正己烷(用乙腈饱和过)，涡旋1 min，静置分层，弃去上层正己烷层.如果样品中含有较多的脂肪,则重复上述净化步骤直到正己烷层变清。乙腈层氮气吹干，5 mL 20%甲醇水溶液复溶，待净化;
b. 对于加工过的及含脂肪量高的水产品或肉类,加入1 mL甲醇,涡旋1 min,加入15 mL 4%的氯化钠溶液，10 mL正庚烷，振摇30 sec，静置分层(若分层不好，可稍加离心，1000 rpm,1 min)，弃去上层正庚烷层，再加入10 mL正庚烷重复一次去油步骤，下层液体待净化。
3. 净化
活化/平衡：依次用3 mL甲醇和3 mL水通过Welchrom® BRP, 60mg/3mL (P/N：WSP010306)固相萃取小柱，流出液弃去;
上样：将上述待净化液加入柱中，流出液弃去;
淋洗：用3 mL 20%甲醇淋洗小柱，流出液弃去;
洗脱：3 mL甲醇洗脱，收集洗脱液
40℃氮气吹干，1 mL 50% 甲醇溶解，0.22μm针孔滤膜过滤后，待分析;
4. 色谱质谱条件
4.1 色谱条件
色谱柱： Xtimate C18 液相色谱柱(2.1 mm*50 mm, 3 μm)
流动相：
| 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 75 25 3 75 25 6 2 98 8 2 98 8.1 75 25 12 75 25 |
A: 纯水
B：乙腈
梯度洗脱
流速： 0.4 mL/min
进样量： 10 μL
柱温： 40°C
运行时间：12 min
4.2 质谱条件
扫描模式：MRM
离子源：ESI+
毛细管电离电压：3000v
干燥气温度：350 ℃
干燥气流速：11 L/min
雾化器压力：50 psi
|
名称 |
母离子 |
子离子 |
碎裂电压 （Fragment）
|
驻留时间 （ms） |
碰撞能量 （V） |
定量离 子对 |
定性离 子对 |
|
氯霉素（CAP） |
321.0 |
152.1 |
110 |
100 |
18 |
+ |
- |
|
257.2 |
110 |
100 |
11 |
- |
+ |
||
|
120.9 |
110 |
100 |
23 |
- |
+ |
||
|
CAP-D5 |
326.1 |
157.1 |
120 |
100 |
20 |
+ |
- |
5. 结果
5.1 回收率和重现性实验
将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次（样品典型回收率色谱图见附图）。
|
添加水平（μg/kg） |
||||||
|
分析物 |
0.5 |
2 |
10 |
|||
| Recovery (%) | RSD (%) | Recovery (%) | RSD (%) | Recovery (%) | RSD (%) | |
| 氯霉素 |
103.9 |
9.29 |
97.5 |
3.53 |
95.5 |
6.27 |
5.1 色谱图
图 鳕鱼中添加10 mg/kg 氯霉素EIC谱图
本方法中使用到得耗材：
1. 固相萃取小柱：Welchrom® BRP, 60mg/3mL (P/N：WSP010306)
2. 色谱柱：Xtimate C18, 2.1*50 mm，3μm(P/N:Xt3B18205)
3. 13mm，孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)
4. 12孔固相萃取装置(WEL-Vac-12)
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