石蜡切片神经元高尔基法快速染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
石蜡切片神经元高尔基法快速染色试剂是一种旨在使用亲银还原技术，分析固定处理的石蜡包埋组织切片中神经元（neuron）、锥体细胞（pyramidal cell）、胶质细胞（glia cell）、少突触胶质细胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其树突（dendrites）形态学的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良Golgi-Cox方法、成功实验证明的。主要适用于脑组织或外周神经组织石蜡切片的相关神经细胞检测。广泛用于动物脑神经病理生理解剖学的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
意大利科学家高尔基（Camillo Golgi）于1873年发明了神经细胞黑色反应的浸银染色技术，从而开辟了神经系统形态结构、演变、单系发生、构建以及疾病等学科研究，并建立了神经学说。脑神经组织经固定，亲银染色后，呈现部分神经细胞完全染色，而其它神经细胞没有任何着色的高度选择性染色。
产品内容
固着液A（Reagent A） 毫升
固着液B（Reagent B） 毫升
脱蜡液（Reagent C） 毫升
补水液A（Reagent D） 毫升
补水液B（Reagent E） 毫升
补水液C（Reagent F） 毫升
清理液（Reagent G） 毫升
染色液（Reagent H） 毫升
显色液Ａ（Reagent I） 毫升
显色液B（Reagent J） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月
用户自备
30％蔗糖：用于样品脱水处理
无离子水：用于工作液配制
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
无菌手术刀和镊子：用于解剖动物脑组织
小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器
切片机：用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
样本固着处理
常规麻醉动物和手术（建议：使用生理盐水由心脏处灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）即刻小心取出脑组织
用无菌手术刀将脑组织切成0.5厘米厚的组织块
即刻用无菌镊子夹起组织块
小心转移到含有xx毫升固定液A（Reagent A）和xx毫升固定液B（Reagent B）的混合液里（20毫升/2块组织块）
室温下浸泡孵育2周，避免光照
小心转移到用户自备的30％蔗糖溶液里
在4℃温度下浸泡孵育48小时，避免光照（注意：不宜超过1周）
用绵纸吸干组织快
即刻进行常规石蜡处理后包埋
取出组织块，进行缓慢石蜡切片，为20至100微米厚，并铺片在明胶化载玻片上
脱蜡处理
取出10片待测的20至100微米厚的石蜡包埋的组织切片
按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸 | 孵育时间 |
xx毫升脱蜡液（Reagent C） | 15分钟 |
xx毫升脱蜡液（Reagent C） | 15分钟 |
xx毫升脱蜡液（Reagent C） | 15分钟 |
xx毫升补水液A（Reagent D） | 3分钟 |
xx毫升补水液B（Reagent E） | 3分钟 |
xx毫升补水液C（Reagent F） | 3分钟 |
xx毫升清理液（Reagent G） | 3分钟 |
小心移去切片上的清理液（Reagent G）
样本染色处理
准备一个20毫升塑料瓶，加入10毫升用户自备的无离子水，然后分别加入xx毫升显色液A（Reagent I）和显色液B（Reagent J），混匀，标记为显色工作液（有效使用10天），避免光照。然后进行下列操作。
小心加上xx微升染色液（Reagent H），铺满整个切片样品表面
室温下孵育30分钟
小心移去切片上的染色液（Reagent H）
室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent G）中孵育1分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent G）
小心加上xx微升显色工作液，铺满整个切片样品表面
室温下孵育10至30分钟，直至呈现黑色，即刻终止，避免光照（注意：期间可以在显微镜下观察）
小心移去切片上的显色工作液
室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent G）中孵育1分钟
小心移去切片上的清理液（Reagent G）
（选择步骤）进行复染操作（建议使用甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒－YIJI80052）
透明处理
放上盖玻片或封片（中性树脂）
即刻在一般光学显微镜下观察：神经元、锥体细胞、胶质细胞、少突触胶质细胞（椭圆形如同串珠）和其它突起，呈现黑色（如果复染――细胞核呈现蓝色，胞浆尼氏（体）物质呈现粉红至紫色）
注意事项
本产品为20次操作
操作时，须戴手套
试剂具有腐蚀性，注意操作安全，尤其使用染色液（Reagent H）
铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：第一用毛笔涂刷；第二保持湿润3小时；第三用PARAFIN包裹后压片
切片建议100至200微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞
建议使用玻璃染色缸
每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
整个操作，在避光状态下进行
染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
样品染色后保存，避免光照
本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定显色清晰
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