原代细胞免疫荧光鉴定步骤

为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞，使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型，免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤，仅做参考：

1.细胞爬片

取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。

2.固定

细胞爬片后，吸出培养基，用PBS洗一遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃过夜。

3.破膜封闭

将玻片除去水分，置于培养皿支撑物上，玻璃片封闭液配置：0.5% Trition X-100与PBS 1:1混合，再加10% 血清，取50uL破膜封闭液滴于防水膜上，将玻片上有细胞的一面盖上2h。

4.一抗孵育

一抗配置：抗体与PBS 1:100（200）稀释

破膜后，取50uL一抗于防水膜上（湿盒中），将玻片有细胞的一面盖上置于4℃（最多可放置一周）

阴性对照组可用PBS代替一抗。

5.二抗孵育

PBS洗3×5min/次，

二抗混合液配置：二抗：PBS=1:500

DAPI:PBS=1:1000

防水膜上滴50uL二抗混合液，盖上玻片，避光，室温放置2h。

6.包埋

PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。