组织硫化氢含量比色法定量检测试剂盒说明

主要用途

组织硫化氢含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过碱性苦味酸与肌酐反应，产生蓝色产物所呈现的吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中硫化氢含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良亚甲基蓝方法、成功实验证明的。其适用于各种人体、动物组织裂解样品等硫化氢水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

硫化氢（hydrogen sulfide；H2S）是一种自然发生的，具有腐蚀性和可燃性，不稳定的易被氧化的无色气体，为半胱氨酸脱硫（desulfuration）代谢产物，是第三个生理性气体信使分子（messenger molecule）或气体传导分子（gasotransmitter），存在于脑、心脏、肺、肝、小肠、胰腺以及海绵体（cavernosum）组织等，其中脑组织含量较低，肾组织含量较高。神经系统的胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）和心血管系统的胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase；CGL）是参与内源性硫化氢生成的主要成员。一旦机体缺氧，硫化氢含量即增高。硫化氢旨在调节组织内含硫氨基酸的水平，具有心血管系统的生理功能和病理生理调节作用，例如诱导血管平滑肌松弛，血管扩张（vasodilation），致血压下降，以及促炎性作用。同时硫化氢具有毒性作用，会造成嗅觉神经迅速瘫痪，抑制细胞色素C氧化酶，增加线粒体膜通道孔开放，引起心脏、小肠、生殖系统、泌尿系统和呼吸系统平滑肌过度松弛，而产生器官损伤、低血压、心动过缓（bradycardia）等症状。在自然环境中，硫化氢是硫循环（sulfur cycle）的主要中间产物，包括有机硫化物的矿物化或分解、微生物的同化作用，以及氧化还原。作为化学窒息性（asphyxiant）气体，硫化氢对于鱼类和其它水生动物具有毒性作用，同时也是细菌污染的标志。使用醋酸锌（zinc acetate）在碱性条件下，捕获硫化氢，形成稳定的硫化锌沉淀；在酸性条件下，溶解的硫化锌与催化剂对氨基二甲基苯胺（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine）和氯化铁（ferric chloride）反应，产生蓝色的亚甲基蓝（methylene blue），通过其终点吸收峰值的变化（670nm波长），来定量分析硫化氢的含量。                      

产品内容

清理液（Reagent A） 毫升

稳定液（Reagent B） 毫升

去干扰液（Reagent C） 毫升

反应液（Reagent D）   毫升

显色液（Reagent E）   毫升

标准液（Reagent F）   毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存反应液（Reagent D）和GENMED标准液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞

微型台式离心机：用于样品操作

比色皿：用于比色的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

样品准备

• 手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量  

• （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

• （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

• 即刻用刀片切碎组织

• 放进一个预冷的15毫升锥形离心管

• 加入预冷的xx毫升清理液（Reagent A）

• 涡旋震荡5秒，充分混匀

• 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约40至80下） 

• 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管

• 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g

• 移取500微升到新的1.5毫升离心管

• 加入xx微升稳定液（Reagent B），混匀

• 放在冰槽里待测（注意：须1周内使用）

标准样品准备

• 移取xx微升标准液（Reagent F）到新的1.5毫升离心管

• 加入xx微升稳定液（Reagent B），混匀

• 放在冰槽里待测

测定准备

• 准备好待测样品，置于冰槽里

• 设定好分光光度仪：波长670nm，并置零

样品测定

• 移取xx微升去干扰液（Reagent C）到上述待测样品或标准样品管里，混匀

• 加入xx微升反应液（Reagent D）

• 加入xx微升显色液（Reagent E），混匀

• 室温下孵育20分钟

• 放进微型台式离心机离心3分钟，速度为5000g

• 移取1毫升上清液到比色皿

• 即刻放进分光光度仪检测，获得待测样品和标准样品读数

四、计算样品浓度

转化为组织实际硫化氢含量

注意事项

• 本产品为20次操作，包括标准样品

• 本产品检测范围在0.1毫克/升（10微摩尔/升）至8.5毫克/升（250微摩尔/升）

• 操作时，须戴手套

• 试剂具有腐蚀性，注意操作安全

• 系统操作过程中，标准样品测定只需1次

• 试剂出现沉淀可以离心去除后检测

• 测定值由低到高变化

• 用户可以使用664nm至670nm波长范围的任一波长进行检测

• 比色测定后，比色皿须清洗彻底

• 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品量

• 样品中碘（iodine）大于2毫克/升、硫代硫酸盐（thiosulfate）或亚硫酸盐（sulfite）大于10毫克/升、氰亚铁酸盐等可能干扰检测

• 硫化氢浓度换算：1毫克/升=29.4微摩尔/升

• 本公司提供系列生化学检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定

• 本产品经鉴定检测敏感