1.引言
替加环素（Tigecycline）又名9- 叔丁基甘氨酰胺基米诺环素、丁甘米诺环素，是首个被批准用于临床的静脉内给药的甘氨酰四环素类抗生素，具有超广谱的抗菌活性，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性的好氧菌及厌氧菌等临床分离的重要致病菌。替加环素的作用机制与四环素类抗生素相似，都是通过与细菌30S 核糖体结合，阻止转移RNA的进入，使得氨基酸无法结合成肽链，最终起到阻断细菌蛋白质合成，限制细菌生长的作用。替加环素能够克服或限制细菌的外排泵和核糖体保护两种耐药机制的作用，不易产生耐药性，其广泛的组织分布和较长的清除半衰期的药动学性质令人乐观；同时对于肾功能紊乱及需进行血液透析的患者，不必进行剂量和时间上的调整。2005 年6 月美国FDA 批准用于成人复杂皮肤及软组织感染和成人复杂的腹内感染，但在国内尚处于临床研究、申报生产阶段。
本实验建立了测定血浆中替加环素的LCMSMS 方法，采用适当的样品前处理方法，血浆中的杂质不干扰样品的测定，具有灵敏度高，重现性较好等特点。
2．实验部分
2.1 仪器与试剂：
TSQ Vantage 三重四极杆串联质谱仪（赛默飞世尔科技Thermo Fisher Scientific 公司），配置有电喷雾电离源（ESI）；Dionex Ultimate 3000 RSLC 超高压液相色谱。
标准品：替加环素和内标盐酸四环素纯度均大于98％，信息见表1。用甲醇溶解并配制成1.0 mg/mL 标准储备液，再根据需要稀释成适当浓度的混合标准工作液。其他试剂均为HPLC 色谱纯。
表1. 待测化合物信息
2.2 仪器方法：
2.2.1 液相条件：
色谱柱：Hypersil GOLD C18，100mm×2.1mm；
梯度洗脱程序见表2，进样量5μL。
表2. 液相色谱梯度条件
时间/min | 水(0.2%甲酸+5mM甲酸铵) | 乙腈 | 流速/μL/min |
0.00 | 95 | 5 | 400 |
3.00 | 20 | 80 | 400 |
3.50 | 20 | 80 | 400 |
3.60 | 95 | 5 | 400 |
5.00 | 95 | 5 | 400 |
2.2.2 质谱条件：
电喷雾电离源（ESI），正离子模式；选择反应监控（SRM）扫描模式，喷雾电压：3000V；气化器温度320℃，离子传输管温度：350℃；氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气为35arb，辅助气为10arb，氩气用作碰撞气, 碰撞压力为1.5mTorr；选择反应监测（SRM），离子对信息见表3。
表3. SRM 模式中的离子对信息
其中，替加环素选取m/z 513.2，四环素选取m/z 410.2 的离子作为定量离子。
2.3 血浆样品处理方法：
向0.2mL 血浆中加入10μL 内标液（100ng/mL 四环素溶液），加入100μL20% 三氯乙酸（TCA） 沉淀蛋白， 涡旋混合1min，离心10min（13000r/min），取5μL 上清液进样分析。
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