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基于脾气虚的脾阳虚大鼠模型的复制方法及评价...(二)

2020.5.25
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

2 结果

2.1  大鼠代谢水平  由表 1 可见,与对照组 P1 比较,模型组 P1 大鼠的体质量、进食量和进水量均下降,该组大鼠出现消瘦和食少;与对照组 P2 比较,模型组 P2 的体质量、肛温、进食量和进水量均减少,该组大鼠出现了消瘦、畏寒和食少,而大便含水率增加,该组大鼠出现便溏;与模型组 P1 比较,模型组 P2 的体质量和肛温均下降,但大便含水率升高。

2.2  大鼠神疲乏力情况  图 1 和表 2 可见,对照组P1 和 P2 比较无明显差异,大鼠活动区域大,运动距离远,站立次数多,前肢抓力大;与对照组 P1比较,模型组 P1 和 P2 的活动区域明显变小,运动距离、站立次数和前肢抓力均明显下降,提示两组大鼠出现了神疲和乏力现象;与模型组 P1 比较,模型组 P2 的活动区域更小,甚至没有形成闭合运动轨迹,上述 3 个指标均降低,表示该组大鼠的神疲和乏力更加严重。

3 讨论

动物模型是中医证候研究的重要内容,其复制过程应符合中医理论,不能单纯进行症状模拟,还应考虑病因,甚至是模拟相关病机。通常认为,脾阳虚的发生多源于脾气虚,也可因外寒直中、苦寒伤阳和肾阳不足。由于病因较多,本研究仅选择了脾气虚和苦寒伤阳两个进行模拟,即以脾气虚大鼠为对象,通过灌服番泻叶,达到损伤脾阳的目的。而在复制脾气虚模型时,首先考虑的仍然是病因病机。诱发脾气虚的病因有饮食不节,劳倦过度,忧思日久,禀赋不足,素体虚弱,年老体衰,大病初愈,调养失慎等。还是由于病因较多,本研究选择了较为常见的饮食不节和劳倦过度进行模拟,即采用饱食 1 d,饥饿 2 d,结合每日力竭游泳,造成脾气虚。因此,本实验在复制脾阳虚模型的过程中,先后施加的因素有饮食失节、劳倦过度和苦寒伤阳,分别模拟了脾气虚和脾阳虚证的部分病因病机,同时也限定了本实验所复制的脾气虚为饮食不节和疲劳型,脾阳虚为脾气虚和苦寒伤阳型。

由于模型复制为阶段性,其评价也应分阶段进行,从而有效质控模型复制过程。本研究依据二证的临床辨证要点,结合大鼠的生物学特征,建立了较为简便易行的模型评价标准。首先根据脾气虚的临床辨证要点,即食少、腹胀、便溏及气虚证等,建立大鼠脾气虚的评价标准为:消瘦,食少,神疲,乏力;其次根据脾阳虚的临床辨证要点,即脾气虚的症状加虚寒证,设立大鼠脾阳虚证的模型评价标准为:消瘦,食少,神疲,乏力,畏寒,便溏。实际上,后一评价标准为前一标准加上畏寒和便溏,即脾气虚加寒象,这体现了模型评价的连续性。依此标准,本研究在造模的 P1 和 P2 进行阶段性评价。探索客观简便的模型评价方法一直是中医证候模型研究的重要内容,其目的是减少主观因素对实验的干扰,提高模型复制的成功率,确保模型复制的稳定性,从而保证实验结果的可重复性。针对上述评价标准,本实验建立了较为客观和简便的检测方法,以评估大鼠的类人症状。实际上,目前已经能够通过检测大鼠的体质量、肛温、进食 / 水量和大便含水率等,分别对消瘦、畏寒、食少和便溏等进行量化评价。本实验结果显示,模型组 P1 的体质量、进食 / 水量均低于对照组 P1,但肛温和大便含水率无明显变化,表明大鼠在接受 15 d 的饮食不节和力竭游泳刺激后,出现了消瘦和食少,但无畏寒和便溏现象;模型组 P2 的体质量、进食 / 水量、肛温均

低于对照组 P2,且大便含水率显著增加,说明该组大鼠出现了消瘦、食少、畏寒和便溏等类人症状。

与上述指标不同,“神疲”和“乏力”属于自述性疲劳症状,仅凭目测难以客观判定大鼠的疲劳程度,特别是难以区分二者在脾气虚和脾阳虚中的差别。本课题组前期工作提出,“神疲”和“乏力”均属于疲劳范畴,但前者主要是中枢性,后者则为外周性,可以分别采用旷场实验和检测大鼠双前肢抓力进行客观评价。本实验观察到,对照组 P1和 P2 大鼠进入检测箱后,更多地活动于四周较暗区域,并有快速通过中心强光区域的现象,其运动距离远、站立次数多,显示这些大鼠能够准确感知不同区域的光照强度,具有明显的趋暗现象,并对新鲜环境表现出较强的探索能力,反映了大鼠的中枢神经系统处于明显兴奋状态。与此相比,模型组P1 和 P2 的活动范围小,运动距离和站立次数均显著降低,提示大鼠中枢神经系统的兴奋度程度较低,探索“意愿”较差,处于“神疲”状态。在大鼠双前肢抓力方面,结果显示模型组 P1 和 P2 的前肢抓力分别低于对照组 P1 和 P2,提示大鼠出现“乏力”表现。

汇总上述实验结果,可以看出,模型组 P1 的体质量、进食 / 水量、旷场中运动距离和垂直活动次数,以及前肢抓力等,均显著低于对照组 P1,表明该组大鼠出现了消瘦、食少、神疲和乏力等类人症状,处于脾气虚状态。而模型组 P2 的上述指标与肛温均显著低于对照组 P2,且大便含水率显著增加,说明该组大鼠除了产生脾气虚的类人症状外,还有畏寒和便溏现象,已经处于脾阳虚状态。此外,通过模型组 P1 和 P2 之间的比较,还可以发现脾阳虚时大鼠的体质量、肛温、运动距离和站立次数明显低于脾气虚,大便含水率显著高于脾气虚,但两者在进食 / 水量方面没有明显差异,这些说明从脾气虚发展为脾阳虚时,尽管大鼠的纳少症状没有进一步加重,但大鼠更加消瘦,神疲和乏力更为严重,并出现了畏寒和便溏等较为明显的寒象。

综上所述,本研究所采用的阶段式造模方法和评价标准,能够成功地复制大鼠的有限性脾阳虚证模型,并且在消瘦、神疲、乏力、畏寒和便溏等方面与脾气虚进行有效区分。


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