操作说明:
自备新开封或专用氯仿，异丙醇，75%乙醇，DEPC处理水。
1.
细胞裂解或组织匀浆： 1)贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）细胞加入1 ml TriQuick
Reagent,使其覆盖培养细胞，再用吸管或加样器吹打2~3次，细胞应完全裂解，然后转移至离心管中。2)悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万（5×106-1×107）动植物或酵母细胞，或一千万
(1×107)细菌，加入1ml TriQuick Reagent
。用吸管或加样器吹打，使其完全裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保其完全裂解。转移至离心管中。3)组织：先将组织剪切成小块，放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每50-100mg组织加入1ml
TriQuick Reagent ，匀浆至完全裂解。转移至离心管中。
裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置5分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品，匀浆后仍会存留有不溶物质，可12000g
4℃离心10分钟，然后吸取上清至一新的离心管中。
2. 分离：在装有裂解物的离心管中加入0.2倍体积的氯仿（1 ml
TriQuick Reagent 加入0.2 ml氯仿），振荡器上充分振荡混匀30秒，室温放置2-3分钟。12000g
4℃离心10分钟，然后吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中，每毫升TriQuick Reagent 约可吸取0.5-0.6
ml。有机相和中间层含有DNA和蛋白质，应避免触及。
3. 沉淀：按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5
ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。12000g 4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀。弃上清，按每毫升TriQuick
Reagent 加入1 ml 75%乙醇，轻轻颠倒混匀，以清洗RNA沉淀。12000g
4℃离心2分钟，弃去液体，小心勿丢弃RNA沉淀。室温倒置晾干5~10分钟。4. 溶解：加入适量DEPC处理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。
注意事项：
1，RNA提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无RNA酶。操作中应小心，防止外源性RNA酶污染样品导致RNA样品降解。2，试剂中含有酚等有害物质，注意个人防护。
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