细胞膜电位荧光探针
DiBAC4(3)是一种细胞膜电位敏感的亲脂性阴离子荧光染料，DIBAC4(3)本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光，DIBAC4(3)进入细胞，细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，细胞内荧光强度降低即膜电位降低表示细胞超极化。DiBAC4(3)是目前最常用的线粒体膜电位检测荧光探针、钙离子荧光探针FLUO-3AM应用详解
一、Fluo-3AM的理化性质
颜色及形状：橘红色液体
纯度：，大于95%（高效液相）
溶解性：溶于DMSO
吸收波长/发射波长：506nm /526nm(低/高钙)
消散系数：86000/Mcm(506nm)
保存与使用：粉状的FLUO-3AM应保存于-20度以上。建议使用DMSO作为溶媒。在溶解前，FLUO-3AM和DMSO均须放置至室温。溶解过程可能会比较慢。用无水的DMSO溶解的FLUO-3AM长期保存，应严格密封，并保存于-20度。使用前，将保存液放置至室温后再打开。可避免AM探针在长期的保存过程中水解。
二、Fluo-3AM的工作原理
FLUO-3广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506NM处被吸收，可以被氩离子激光的488nm激发光激发，便于检测。FLUO-3在没有同钙结合的情况下，无荧光产生。但是，在与钙结合后，荧光（526nm）增强至少40倍。Fluo-3
AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3
AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525-530nm。
三、Fluo-3AM的应用
1、过程概述
用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3
AM的常用浓度为5μM。通常用含有5μM的Fluo-3
AM的适当溶液和细胞一起在37℃孵育30-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3
AM在细胞内完全转变成Fluo-3。然后在流式细胞仪上进行检测。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按实际需要的摩尔浓度折算，无水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO储存液。如出现难溶现象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事项：
1、荧光染料有淬灭问题，应尽量避光保存；
2、实验时注意个人防护，戴手套、口罩。
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