Vero细胞在转瓶 （Spinner Flask)中无血清条件下的微载体培养
Vero细胞也可以在转瓶中进行微载体培养。如图 14 所示，在无血清条件下，WAVE 和转瓶这两种培养系统中可以获得基本相同的最大细胞密度。相比 Cytodex3，Cytodex 1 具有更大的表面积，因而得到更高的细胞密度。Vero细胞在WAVE Bioreactor系统中培养过程中，接种 4天后细胞达到汇合。我们观察到细胞在这两种微载体上生长迅速，无延滞期（图14）；相比转瓶而言，WAVE 反应器中细胞生长速度更快。
图 14. Vero 细胞分别在WAVE Bioreactor 系统和转瓶中采用Cytodex 1和Cytodex 3无血清培养的比较。
图 15显示Vero细胞在Cytodex 1和Cytodex 3上培养4 天后的细胞形态。
透明的 Cytodex 微载体可以不经染色直接镜检，使用台盼蓝染色可以快速观察细胞是否达到交汇（图 16）。活细胞完整的细胞膜将会阻断台盼蓝染料，并阻止微载体被染色。无细胞覆盖的微载体很容易被染色，因此可以方便的看到细胞层中的缺陷或空洞。
图16.WAVE Bioreactor系统内Cytodex 3上汇合的Vero细胞进行台盼蓝染色观察。
结论
本研究发现WAVE Bioreactor系统是一种可以成功用于 Cytodex 微载体培养 MDCK 和 Vero细胞的通用生物反应器。MDCK 和 Vero 细胞具有高的微载体贴壁率。我们发现 WAVE Bioreactor系统和转瓶对于MDCK和Vero细胞的最大细胞密度是相似的， 但WAVE中具有更快的生长速度。对于微载体培养，建议最佳工作体积为最大Cellbag工作体积的20%到80%。
MDCK细胞
· 本研究获得最大细胞密度为3×106细胞/ml，这与使用转瓶在类似的生长条件下所获得
的细胞密度相似。
· 我们使用类似的摇动混合条件，成功的将微载体培养从2 L放大到 10 L培养袋。
Vero细胞
· 我们优化了对 Vero 细胞的接种贴壁操作程序，成功的在无血清条件下获得 80%以上
的细胞贴壁率。
· Vero 细胞在无血清培养基中成功的在Cytodex 1 和 3上进行培养，可以获得均匀的细胞分布，最终细胞在微载体上达到交汇。
· 在无血清条件下，Vero 细胞生长达到最大密度，约为1.4×106细胞/ml，细胞密度与在转瓶中生长的 Vero 细胞相似，WAVE 具有更快的生长速度。
首页
