WAVETM 生物反应器中的 Cytodex™ 微载体细胞培养工艺（五）

MDCK细胞的生长和放大（2% FBS）

    为了研究在 Cellbag 生物反应器中 MDCK细胞扩增的可放大性，在两种不同大小的袋子之间比较最大细胞密度和细胞生长速率 Cellbag-10 L和 Cellbag-50 L。 袋子的工作培养体积采用最大工作体积的40%（即Cellbag-10 L中为2 L，  Cellbag-50 L中为10 L）。

    微载体用量为3 g/l的 Cytodex3， 接种细胞密度为0.3×106细胞/ml。MDCK细胞采用摇动速度8 rpm和 5º角度混合。细胞培养期间，在保持角度不变的条件下将摇动速度以阶梯方式逐渐从 8  rpm 提高到 14 rpm。培养温度 37℃，pH  7.4，并监测溶氧水平，细胞培养基中含有2% FBS。

    经过最初的延滞期后，细胞终密度达到3×106细胞/ml，和在转瓶(Spinner Flask)中所获得的最大细胞密度类似。 2L和 10L培养体积的细胞生长状况类似，因此显示出良好的可放大性（图12）。

图 12. 对于 2 L和 10 L的培养体积，MDCK细胞的生长状况类似，表明 WAVE良好的可放大性。

    Vero细胞在Cytodex 1和Cytodex 3微载体上无血清培养条件下的生长

    接种量为4×105细胞/ml 的Vero细胞在含有2 L无血清培养基的Cellbag-10 L中的分别进行Cytodex 1和 Cytodex 3培养。细胞经过间歇摇动混合6 h (16 rpm和4.5º下2 min, 然后0 rpm和 0º 停止摇动18 min)。图13A显示Vero细胞在Cytodex 3上培养6 h 后完全铺展，但是在Cytodex 1上细胞没有铺展开来（图 13 B）。为了提高Vero细胞在 Cytodex 1上的铺展，培养物停止摇动2 h，改进了细胞在Cytodex 1上铺展状况（图13 C）。之后，在 37℃下两种培养物都采用连续摇动的方式继续培养（11 rpm和4.5º）。

Cytodex 1

Cytodex 3

图 13.Vero细胞贴附到微载体后的形态。接种后 6 h和 8 h。