实验方法原理 限制性内切酶可识别特定位点并切割DNA产生粘性末端或平端的外源片段，经DNA的纯化处理后用于连接反应；选择克隆载体pUC18多克隆位点上相应的限制性内切酶切割，并用碱性磷酸酶处理防止载体自连；在连接酶的作用下将外源片段连接到载体上，实现外源片段的克隆。
实验材料 DNA片段PUC18
试剂、试剂盒 R.Ebuffer水凝胶氯仿 异戊醇乙醇
仪器、耗材 离心机
实验步骤
载体pUC18和外源DNA片段的限制性酶切：
50 μl反应体系，用1.5ml tube，冰上操作）
DNA 30 μl
R.E 1 μl
10×buffer 5 μl
ddH2O 14 μl
外源片段酶切产物和5 μl 37 ℃反应1hr，分别取8 μl PUC18酶切产物于1.0%凝胶检测酶切是否完全；按2－5步纯化、回收DNA
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