试剂、试剂盒 酶溶液DRG

仪器、耗材 离心管培养皿解剖显微镜

实验步骤

1. 解剖前在 15 ml 离心管中配制酶溶液，置 37℃ 水浴特用。

2. 解剖胚胎，解剖全过程保持组织湿润。

(1) 杀死胚胎，去腿，放于 100 mm 培养皿。

(2) 用钝头剪刀沿腹中线作一切口，将皮肤向两侧卷缩至能取出内脏。

(3) CMF-PBS 漂洗体腔。

(4) 用细镊子或用 CMF-PBS 吹打，小心去掉脊柱上的任何黏附组织。

3. 在解剖显微镜下，用细镊子从脊髓上细心撕下脊膜。取出交感神经节，即 DRG 上脊髓两侧的细条带。

4. 用微簧剪刀从神经干上剪下神经节，用细镊子从脊髓上摘下 DRG，放于盛有 1 ml CMF-PBS 的 35 mm 培养皿。

5. 分离适量 DRG，确保无任何黏附组织或神经干，时间以不超过 45 分钟为宜。

6. 在预热的酶溶液中加 1 ml 含 DRG 的 CMF-PBS。37℃ 水浴孵育 8 或 13 分钟，每隔 3 分钟颠倒一次管子。

7. 加入 1 ml FBS 终止酶反应，沉淀 DRG。CMF-PBS 清洗 DRG，再沉淀。

8. DRG 悬于 1 ml 补给了 NGF 的完全培养基（37℃）。用尖端内径烧至一半的巴斯德吸管轻轻吹散细胞（6 次）。如果仍有组织块残留，使其沉降，细胞悬液转移至另一支 15 ml 无菌离心管。重复吹散残留组织块，两次样品混合。

9. 计数分散细胞，根据需要以合适密度接种。