实验材料 HeLa 细胞
试剂、试剂盒 Earle’s 平衡盐溶液RSB
仪器、耗材 玻璃盖玻片
实验步骤
1. 悬浮培养出 HeLa 细胞，600 g 离心 5 分钟收集细胞。
2. 沉淀细胞用 5 倍体积 4℃ 预冷的 Earle’s 平衡盐溶液重新悬浮。
3. 重悬浮的细胞在 4℃，600 g 离心 5 分钟，或者如步骤 1 所说加以延长。
4. 用 10 倍体积的 RSB 重悬浮洗过的细胞沉淀，使离心管在冰上放置 10 分钟。
RSB：
0.1 mol/L NaCl
1.5 mmol/L MgCl2
0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)
5. 将一巴斯德吸管头伸入细胞悬液 0.5~0.75 cm，通过虹吸作用取少量细胞涂到一载玻片上。
6. 其上覆盖一块 22 mm2 的玻璃盖玻片，在相差显微镜下检查细胞。
7. 将膨胀的细胞吸到预冷的玻璃 Dounce 匀浆器中。
8. 快速向上抽出研杵 10~12 次，破碎细胞。
9. 取少量细胞悬液在相差显微镜下观察（具体步骤与第 6 步相同）。
10. 细胞悬液的匀浆产物中游离细胞核与完整细胞的比例达到或超过 9.0 后，将悬液在 4℃，1000 g 离心 3 分钟以沉淀细胞核。
11. 用一装有橡胶吸球的巴斯德吸管吸去上清，再用一干净的巴斯德吸管将细胞核沉淀重新悬浮于 10 倍体积的 RSB 中。
12. 按照第 10 步的方法离心细胞核，再用 10 倍体积的 RSR 重悬浮。
13. 重复第 12 步。
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