实验材料 蛋白质
试剂、试剂盒 Tris腹水液宁酸盐缓冲液甘氨酸乙酸盐缓冲液
仪器、耗材 超滤器滤膜
实验步骤
1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。
2. 腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。
3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所收集蛋白体积的1/4。
4. 采用ELISA法检测抗原特异性MAb。
5. 在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1~5 mg/ml，所用超滤膜为XM50，将单克隆抗体存于-20℃。
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